檸檬生物活性物質(zhì)分離純化及工藝研究.pdf

1、檸檬（Citrus limon）中功能成分豐富，近年來隨著經(jīng)濟發(fā)展，專家學者們越來越關(guān)注植物保健品的開發(fā)，檸檬具有降血糖、抗菌、抗氧化性等多種生物活性，奠定了其作為未來保健品的備選來源的基礎，本論文對檸檬中總皂苷、檸檬苦素化合物、微量元素鋅含量進行了測定，并測定了其中超氧化物歧化酶活力，對檸檬多肽進行了初步研究。
　　本文采用大孔吸附樹脂分離、純化了檸檬中的總皂苷，建立了紫外分光光度法對其含量進行測定。結(jié)果表明10倍稀釋檸檬皂苷提

2、取液中總皂苷含量為27.1mg/L，20倍稀釋檸檬皂苷提取液中總皂苷含量為27mg/L，對線性試驗考察顯示總皂苷以人參皂苷Re計在質(zhì)量范圍40~200μg內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9997）。平均加標回收率為102%、108.5%和111%。精密度和重復性表現(xiàn)良好，相對標準偏差分別為1.82%、1.5%。
　　采用80%飽和度硫酸銨提取蛋白質(zhì)的方法初步提取了檸檬中超氧化物歧化酶，并通過修改的Marklund法對其活力進行了測定，得

3、檸檬粗酶提取液活力為25.99u/mL，2.0mg/mL酶標準液活力為332.42u/mL，重復性和精密度試驗表現(xiàn)性良好，RSD為2.15%和2.16%。
　　實驗探討了超臨界二氧化碳萃取檸檬籽中檸檬苦素化合物工藝，并將最佳工藝條件下提取的樣液經(jīng)高效液相色譜進行了含量測定。檸檬苦素標準品在質(zhì)量濃度40mg/L-80mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9993），檸檬籽中其含量為61.03mg/L，樣品在4℃20h內(nèi)穩(wěn)定，重復性和

4、精密度實驗RSD分別為1.04%、1.63%。
　　為了測定檸檬中微量元素鋅的含量，樣品按程序消解15min后，在最佳原子吸收光譜儀工作條件下對其含量進行測定，檸檬汁中鋅含量為1.13μg/g。鋅濃度在0.05μg/mL-0.6μg/mL范圍內(nèi)線型關(guān)系良好（R2=0.9993）,加標回收率為91%、102.25%、105%。對測定不確定度進行了評估，其中對含量結(jié)果影響最大的主要是樣品重復性測定、鋅標準儲備液的含量和最小二乘法擬合標

5、準曲線計算含量，相對不確定度分別為0.59%、0.5%、0.274%，而鋅標準溶液配制時使用的移液槍和容量瓶和樣品消解液定容對測定結(jié)果影響較小，采用電子天平稱量樣品對測定結(jié)果的影響可以忽略不計。
　　采用Khanan方法初步分離檸檬中多肽，并采用超濾離心管截留得到5KD-30KD的檸檬多肽粗提物。茚三酮顯色反應顏色變化為無色變?yōu)樽霞t色變?yōu)樗{色。經(jīng)SDS-PAGE結(jié)果顯示在10kD-15Kd范圍內(nèi)有條帶出現(xiàn)。經(jīng)反相高效液相色譜洗脫檸