檸檬生物活性物質(zhì)分離純化及工藝研究.pdf

1、檸檬（Citrus limon）中功能成分豐富，近年來隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，專家學(xué)者們?cè)絹碓疥P(guān)注植物保健品的開發(fā)，檸檬具有降血糖、抗菌、抗氧化性等多種生物活性，奠定了其作為未來保健品的備選來源的基礎(chǔ)，本論文對(duì)檸檬中總皂苷、檸檬苦素化合物、微量元素鋅含量進(jìn)行了測(cè)定，并測(cè)定了其中超氧化物歧化酶活力，對(duì)檸檬多肽進(jìn)行了初步研究。
　　本文采用大孔吸附樹脂分離、純化了檸檬中的總皂苷，建立了紫外分光光度法對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明10倍稀釋檸檬皂苷提

2、取液中總皂苷含量為27.1mg/L，20倍稀釋檸檬皂苷提取液中總皂苷含量為27mg/L，對(duì)線性試驗(yàn)考察顯示總皂苷以人參皂苷Re計(jì)在質(zhì)量范圍40~200μg內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9997）。平均加標(biāo)回收率為102%、108.5%和111%。精密度和重復(fù)性表現(xiàn)良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.82%、1.5%。
　　采用80%飽和度硫酸銨提取蛋白質(zhì)的方法初步提取了檸檬中超氧化物歧化酶，并通過修改的Marklund法對(duì)其活力進(jìn)行了測(cè)定，得

3、檸檬粗酶提取液活力為25.99u/mL，2.0mg/mL酶標(biāo)準(zhǔn)液活力為332.42u/mL，重復(fù)性和精密度試驗(yàn)表現(xiàn)性良好，RSD為2.15%和2.16%。
　　實(shí)驗(yàn)探討了超臨界二氧化碳萃取檸檬籽中檸檬苦素化合物工藝，并將最佳工藝條件下提取的樣液經(jīng)高效液相色譜進(jìn)行了含量測(cè)定。檸檬苦素標(biāo)準(zhǔn)品在質(zhì)量濃度40mg/L-80mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.9993），檸檬籽中其含量為61.03mg/L，樣品在4℃20h內(nèi)穩(wěn)定，重復(fù)性和

4、精密度實(shí)驗(yàn)RSD分別為1.04%、1.63%。
　　為了測(cè)定檸檬中微量元素鋅的含量，樣品按程序消解15min后，在最佳原子吸收光譜儀工作條件下對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，檸檬汁中鋅含量為1.13μg/g。鋅濃度在0.05μg/mL-0.6μg/mL范圍內(nèi)線型關(guān)系良好（R2=0.9993）,加標(biāo)回收率為91%、102.25%、105%。對(duì)測(cè)定不確定度進(jìn)行了評(píng)估，其中對(duì)含量結(jié)果影響最大的主要是樣品重復(fù)性測(cè)定、鋅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的含量和最小二乘法擬合標(biāo)

5、準(zhǔn)曲線計(jì)算含量，相對(duì)不確定度分別為0.59%、0.5%、0.274%，而鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液配制時(shí)使用的移液槍和容量瓶和樣品消解液定容對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小，采用電子天平稱量樣品對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)。
　　采用Khanan方法初步分離檸檬中多肽，并采用超濾離心管截留得到5KD-30KD的檸檬多肽粗提物。茚三酮顯色反應(yīng)顏色變化為無色變?yōu)樽霞t色變?yōu)樗{(lán)色。經(jīng)SDS-PAGE結(jié)果顯示在10kD-15Kd范圍內(nèi)有條帶出現(xiàn)。經(jīng)反相高效液相色譜洗脫檸