荔枝果肉酚類物質(zhì)分離純化、鑒定及降糖活性研究.pdf

1、本論文以荔枝（Litchi chinensis Sonn.）為材料，研究了30個品種荔枝果實的基本品質(zhì)指標(biāo)，分析了果肉總酚、總黃酮、總原花青素和抗氧化活性;對其酚類物質(zhì)進行了分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定;采用不同實驗?zāi)Ｐ驮u價了果肉提取物的降糖活性，并分析了果肉提取物中降糖的主效成分。主要結(jié)果如下:
　　1、不同品種荔枝果實在單果重、果形指數(shù)、硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸含量等方面存在顯著差異;果肉總酚、總黃酮、總原花青素含量以及抗氧化活

2、性之間呈顯著正相關(guān)關(guān)系，發(fā)現(xiàn)‘褐毛荔’的總酚、總黃酮、總原花青素等含量顯著高于其他品種，且其表現(xiàn)出最強的DPPH和ABTS抗氧化活性。
　　2、利用高效液相色譜(HPLC)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)，在主栽品種‘妃子笑’果肉提取物中鑒定了6種原花青素類物質(zhì)和7種黃酮糖苷類物質(zhì);利用Sephadex LH-20凝膠樹脂層析和制備型HPLC技術(shù)，從‘妃子笑’果肉提取物中分離純化了2種原花青素類物質(zhì)和6種黃酮糖苷類物質(zhì)，利用

3、核磁共振(NMR)技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行確認(rèn)，其中原花青素B2、山奈酚3-O-蕓香糖苷、異鼠李素3-O-蕓香糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、山奈酚3-O-蕓香糖-(1-→2)-O-鼠李糖苷和異鼠李素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷為果肉中首次報道。異鼠李素3-O-蕓香糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、山奈酚3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷和異鼠李素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖

4、苷為荔枝中首次報道。
　　3、利用富含原花青素的‘褐毛荔’果肉提取物，本研究首次較為系統(tǒng)地研究了荔枝果肉原花青素的組成與含量。利用HPLC、高分辨電噴霧電離質(zhì)譜(HRESIMS)和NMR技術(shù)，在‘褐毛荔’果肉提取物中鑒定了32種原花青素，其中A型原花青素15種，B型原花青素17種，聚合度為2-6，其中低聚體（≦3）的原花青素含量占原花青素總含量的84.93％。
　　4、對荔枝果肉酚類物質(zhì)提取物的降糖活性進行研究，結(jié)果表明:不

5、同品種荔枝果肉提取物對α-葡萄糖苷酶抑制活性存在顯著差異，在終濃度為80μg/ml時，‘鑒江紅糯’對α-葡萄糖苷酶的抑制率為97.98％，而‘仙婆果’僅為39.15％;槲皮素、山奈酚、異鼠李素等黃酮苷元具有顯著α-葡萄糖苷酶抑制活性，而其對應(yīng)的6種糖苷類化合物中只有槲皮素3-O-蕓香糖7-O-鼠李糖苷表現(xiàn)出較高的抑制活性(94.63％)。原花青素類物質(zhì)對α-葡萄糖苷酶抑制活性因其化學(xué)構(gòu)型不同而異，兒茶素的α-葡萄糖苷酶抑制活性要高于其同

6、分異構(gòu)體表兒茶素，A型原花青素二聚體(A1、A2)的抑制活性要高于B型原花青素二聚體(B1、B2)。利用人肝癌HepG2細(xì)胞，研究發(fā)現(xiàn)不同品種果肉提取物促進細(xì)胞葡萄糖消耗的活性差異較大，‘褐毛荔’和‘妃子笑’果肉提取物能顯著促進葡萄糖消耗，而‘元紅’、‘糯米糍’和‘蘭竹’等3個品種果肉提取物并未表現(xiàn)出顯著活性。單體物質(zhì)中，表兒茶素可顯著促進細(xì)胞葡萄糖消耗，而槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷、槲皮素3-O-蕓香糖苷、異鼠李素

7、3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷，山奈酚3-O-蕓香糖-(1-→2)-O-鼠李糖苷等荔枝果肉主要黃酮糖苷類化合物均未表現(xiàn)出顯著促進葡萄糖消耗作用。進一步通過相關(guān)性分析表明，不同品種中表兒茶素等原花青素含量與其促進葡萄糖消耗作用呈正相關(guān)關(guān)系，推測原花青素類物質(zhì)可能是荔枝果肉促進細(xì)胞葡萄糖消耗的主效成分。利用KK-Ay糖尿病小鼠模型，分別用‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉提取物飼喂KK-Ay小鼠8周，發(fā)現(xiàn)‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉提取物均

8、能顯著降低KK-Ay糖尿病小鼠的空腹血糖，提高小鼠的口服糖耐量（OGTT），改善其胰島素敏感性(ITT)。
　　本試驗結(jié)果表明，荔枝果肉富含酚類物質(zhì)，主要為黃酮糖苷類物質(zhì)和原花青素類物質(zhì)，品種間酚類物質(zhì)組成差異較大;不同品種果肉提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制活性不同，黃酮糖苷類物質(zhì)中槲皮素3-O-蕓香糖-(1→2)-O-鼠李糖苷和原花青素類物質(zhì)中兒茶素、A型原花青素二聚體對α-葡萄糖苷酶具有較高的抑制活性;‘妃子笑’和‘褐毛荔’果肉