中國被毛孢活性物質(zhì)分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、冬蟲夏草是中國傳統(tǒng)藥物之一（Cordyceps sinensis），意為“冬天為蟲、夏天為草”。在中國，冬蟲夏草一般用于補腎、益肺、保持和提高身體的整體健康水平，并能夠治療疲勞、夜間盜汗、高血糖、高血脂、腎功能不全等疾病。由于冬蟲夏草的獨特藥用價值，市場需求量不斷增加，且野生冬蟲夏草分布地區(qū)狹窄、自然寄生率低、對生活環(huán)境條件要求苛刻，本身資源比較有限，因此，人工發(fā)酵獲得冬蟲夏草無性型菌絲體及其活性成分，成為一種可行并可持續(xù)發(fā)展的方法。在

2、形態(tài)學和分子生物學的基礎上，中國被毛孢（Hirsutella sinensis）已證實為天然冬蟲夏草的無性型菌株。
　　本論文圍繞中國被毛孢發(fā)酵菌絲體展開研究。取發(fā)酵菌絲體，用超純水清洗3次，減壓抽濾，然后將菌體置于烘箱，60℃干燥至恒重。干燥后菌絲體用粉碎機搗成粉末，于4℃密封冷藏，用于接下來的研究。
　　論文首先采用凱式定氮法測得中國被毛孢發(fā)酵菌絲體中總蛋白含量為383.4 mg/g，發(fā)酵濾液中總蛋白為10.804 mg

3、/mL。氨基酸自動分析儀測得中國被毛孢中氨基酸總含量為306.28 mg/g，比天然冬蟲夏草(292.4 mg/g)高，其中組氨酸、精氨酸、谷氨酸含量最高，分別為40.93、36.13、28.25 mg/g。顯色法檢測得中國被毛孢菌絲體中蟲草酸的平均含量為10.99％，并最終確定最佳提取條件為:40℃下，用超純水提取3次，每次1小時。在最優(yōu)條件下，蟲草酸的含量為11.37％。另外，中國被毛孢中主要包括尿嘧啶、鳥苷、腺嘌呤、腺苷和蟲草素等

4、核苷類物質(zhì)，其含量分別為0.123 mg/g、0.308 mg/g、0.551mg/g、0.823 mg/g、0.308 mg/g，均在天然冬蟲夏草含量范圍之內(nèi)?；鹧嬖游展庾V法檢測出中國被毛孢發(fā)酵菌絲體中含有多種元素，其中以Na、K含量最高，分別為1582.9 mg/g、9247 mg/g，其它元素，如Mg、 Ca、Fe、Zn、Cu、Mn、Si、Ni均在天然冬蟲夏草平均含量范圍之內(nèi)，潛在毒性元素Pb、Co、Hg均安全值之內(nèi)。

5、　　其次，采用索氏提取法從中國被毛孢發(fā)酵菌絲體中提取粗脂肪，對粗脂肪甲酯化后，氣相色譜-質(zhì)譜分析其脂肪酸組分。接著對脂肪酸類物質(zhì)進行分離純化，并最終確定其結(jié)構(gòu)。中國被毛孢發(fā)酵菌絲體中粗脂肪的含量為5.66％，略低于天然冬蟲夏草中8.4％的含量。GC-MS確定其脂肪酸組分中主要包括油酸、亞油酸、棕櫚酸，不飽和脂肪酸含量為90.17％。通過分離純化得到EP-1和EP-2兩種化合物，并通過現(xiàn)代波譜技術(shù)確定其結(jié)構(gòu)，EP-1為十六烷酸即棕櫚酸，E

6、P-2為十八烯酸乙酯即油酸乙酯。
　　最后，本論文采用超聲提取法從中國被毛孢發(fā)酵菌絲體中提取多糖，經(jīng)活性炭脫色、Saveg法去蛋白得精制多糖，苯酚-硫酸法測得中國被毛孢中的總多糖含量為3.848％。利用DEAE離子交換柱、葡聚糖凝膠柱和丙烯葡聚糖凝膠柱層析分離得到兩種純化多糖。超純水洗脫部位得中性多糖HSP-1，0.1 mol/L NaCl洗脫部位得酸性多糖HSP-2。對HSP-1和HSP-2乙?；筮M行GC-MS檢測，確定它們的