高效液相色譜在海產(chǎn)品中抗生素類藥物分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、隨著海產(chǎn)品的過度開發(fā)和消耗，海水集約化的現(xiàn)代化養(yǎng)殖已經(jīng)成為海產(chǎn)品供應(yīng)的重要方式，由于能夠預(yù)防疾病、提高飼料報(bào)酬率和提升海鮮質(zhì)量，多種抗生素被廣泛使用。但抗生素在帶來經(jīng)濟(jì)效益的同時，抗生素殘留問題也愈發(fā)嚴(yán)重。殘留抗生素在生物體內(nèi)和自然環(huán)境中不斷蓄積，污染環(huán)境，對人類健康造成威脅。由此，探索簡便、快速、高效、環(huán)境友好型的抗生素殘留檢測分析方法對食品安全和環(huán)境監(jiān)測具有重要意義。
　　本文選擇目前使用廣泛的磺胺、喹諾酮和四環(huán)素類抗生素為待

2、測目標(biāo)物，建立了3類抗生素同時分析檢測的高效液相色譜法；針對海產(chǎn)品的高脂肪和高蛋白特性以及抗生素的兩性性質(zhì)，建立QuEChERS-反相-分散液液微萃取的新方法對海產(chǎn)品中抗生素多殘留進(jìn)行快速檢測。QuEChERS法(Quick,Easy,Cheap,Effective,Ruggedand Safe)用于快速、有效地從海產(chǎn)品中萃取目標(biāo)物，同時除去蛋白質(zhì)；采用基于非極性體系的反相-分散液液微萃取法，以水溶液為微萃取劑，以萃取液為分散劑，對萃取

3、液中目標(biāo)物進(jìn)行快速的分離富集，同時除去脂肪。
　?。?）本實(shí)驗(yàn)采用高液相色譜法作為檢測手段，考察了色譜柱類型、流動相的組成、流速、進(jìn)樣溶液的組成和洗脫梯度等色譜條件對目標(biāo)物色譜行為的影響。確定最優(yōu)條件為：進(jìn)樣溶液用初始流動相稀釋；ZORBAX Eclipse XDB-C18（5μm，150mm×4.6mm）色譜柱；以0.5％乙酸水溶液作為流動相A，流動相B為乙腈；洗脫梯度：0-18min,90%-82%A;18-23min,82%

4、-65%A;23-26min,65%A;26-27min,65%-90%A;27-35min,90%A；流速為0.7mL/min；紫外檢測波長λ=280nm。繪制了8種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性關(guān)系良好，線性范圍在0.18-7.81μg/mL之間。建立的高效液相色譜法適用于磺胺類、喹諾酮類和四環(huán)素類化合物的快速定性定量分析。8種抗生素類化合物在26min內(nèi)全部出峰，峰形尖銳對稱，分離度良好。
　?。?）建立QuEChERS-反相-分散

5、液液微萃取-高相液相色譜法測定海產(chǎn)品中磺胺類和喹諾酮類抗生素。考察了萃取劑種類和酸含量、分散劑的體積、微萃取溶劑的體積和pH值、萃取時間等條件對目標(biāo)物萃取效果的影響。確定最優(yōu)條件為：萃取劑為1mL含1%乙酸的乙腈：水=8:2(V:V)溶液；所得萃取液氮吹到體積為200μL作為分散劑；微萃取劑為50μL含1%乙酸的水；環(huán)己烷體積為3mL；萃取時間為1min。
　　（3）將建立的方法用于金鯧魚、大黃花魚、青魚、白鰱魚和海鯽魚5種魚肉樣

6、品的分析，并進(jìn)行加標(biāo)樣品分析，驗(yàn)證建立的方法的樣品適用性。6種抗生素線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r在0.9951-0.9993之間。6種目標(biāo)物的LOD在0.0218-0.0902μg/g范圍內(nèi)，LOQ為0.0725-0.3007μg/g。加標(biāo)濃度在0.11-0.78μg/g時，回收率在50-108%之間。
　?。?）建立了反相-分散液液微萃取法直接萃取高脂肪類樣品（液體）中抗生素。以性質(zhì)相近、便宜易得的黃油作為魚油代替物，研究了反相-分