脹果甘草細胞培養(yǎng)及查爾酮合成酶基因的cDNA克隆.pdf

1、甘草是中國常用的中藥，是重要的藥用植物。除藥用價值外，甘草在食品、飲料、卷煙、化妝品等工業(yè)中也廣泛使用。近年來，由于人們破壞性地對野生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕。故開展甘草組織培養(yǎng)工作，尤其是大規(guī)模懸浮培養(yǎng)具有重要意義。黃酮類化合物是甘草中一大類生物活性成分，它們具有抗?jié)?、抗菌、抗炎、抗氧化、抗HIV、抗腫瘤等作用。查爾酮合成酶是所有黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶。它催化3分子的丙二酰輔酶A與1分子對羥基苯丙烯酰輔酶A縮合成柚皮素查爾酮，

2、以此為支架其他黃酮類化合物得以衍生出來。查爾酮合成酶活性的積累與黃酮類化合物的積累是緊密相關(guān)的。
　　 本研究切取脹果甘草無菌苗的子葉、胚軸、根段3種外植體進行了愈傷組織誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)，建立了甘草懸浮細胞培養(yǎng)體系，測定了懸浮培養(yǎng)的細胞生長曲線；并且研究了接種量、條件培養(yǎng)基和外源激素對懸浮細胞的影響。結(jié)果表明子葉來源的愈傷組織最適合懸浮培養(yǎng)；懸浮培養(yǎng)的最佳接種量為35g/L；條件培養(yǎng)基的最佳用量為總培養(yǎng)體積的1/3；最適合脹果甘草

3、懸浮培養(yǎng)的的培養(yǎng)基是附加NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L激素組合的MS培養(yǎng)基。利用RT-PCR方法，從脹果甘草愈傷組織中克隆了查爾酮合酶基因的cDNA片斷，并進行了序列分析。測序結(jié)果表明，我們克隆所得到的cDNA片段包含一個開放閱讀框架，由1170bp核苷酸組成，編碼一個由389個氨基酸殘基組成的多肽。與紫花苜蓿、大豆、豌豆等幾種豆科植物CHS基因的核苷酸同源率在80％以上，氨基酸同源率在90％以上。已將得到的序列提交GenBa