靶向寡肽轉(zhuǎn)運蛋白(PEPT1)的新型結(jié)構(gòu)載體前藥研究.pdf

1、口服給藥方便、經(jīng)濟，病患的依從性好，一直是最理想的給藥途徑，但口服生物利用度不高往往是造成許多藥物無法口服給藥的重要原因。在提高口服生物利用度的眾多策略中，靶向轉(zhuǎn)運體，尤其是靶向寡肽轉(zhuǎn)運蛋白（PEPT1）的載體前藥研究，一直是國內(nèi)外近十年來的研究熱點。
　　作為膜蛋白的PEPT1，3D晶體結(jié)構(gòu)至今未破解，基于靶標PEPT1結(jié)構(gòu)的理性化設計難以實現(xiàn)，因此，目前研究思路一般集中在母體化合物的羥基位引入氨基酸修飾，形成氨基酸酯而做的PE

2、PT1底物改造，同一母體化合物的二肽修飾效果優(yōu)于單個氨基酸修飾。一般認為，肽鍵、羧基末端、氨基末端等是修飾后前藥化合物被PEPT1識別和轉(zhuǎn)運的必要結(jié)構(gòu)特征。而在母體化合物的非羥基位修飾，卻罕見文獻報道。
　　然而在后續(xù)研究中證實，除氨基末端以外，肽鍵和羧基末端并非PEPT1識別的必要結(jié)構(gòu)，因此，PEPT1的底物模型特征還難有定論。
　　我們通過對文獻17個頭孢菌素類化合物在Caco-2細胞單層膜的透過系數(shù)的數(shù)據(jù)分析，認為末端

3、氨基也不是PEPT1底物識別和轉(zhuǎn)運所必不可少的特征結(jié)構(gòu)。因此，基于PEPT1底物的可能設計趨向以及我們對底物特征結(jié)構(gòu)的分析和推測，在本論文研究中，我們嘗試在母體化合物齊多夫定的非羥基位引入二肽修飾，同時舍棄氨基末端，設計一個具有新型結(jié)構(gòu)特征的小型化合物庫，并通過PEPT1親和性篩選研究和體內(nèi)外轉(zhuǎn)運和吸收研究，來證實PEPT1對該結(jié)構(gòu)特征的化合物的識別和轉(zhuǎn)運。
　　本論文結(jié)合點擊化學（Click Chemistry）與固相合成技術，

4、建立簡便、高效的合成方法，完成了包含61個化合物庫的合成，并對全庫化合物進行了收率、HPLC、MS以及1H NMR的表征、30％化合物的高分辨質(zhì)譜表征，以及15%化合物的全譜表征，建立了一個具有新型結(jié)構(gòu)的二肽修飾化合物庫。并且，通過寡肽轉(zhuǎn)運蛋白PEPT1已知底物頭孢氨芐的競爭性抑制實驗，完成了化合物庫的PEPT1親和性研究，部分二肽修飾化合物對頭孢氨芐的細胞攝取的抑制率達到80以上；進一步地，通過代表性化合物在PEPT1高表達的Hela

5、細胞模型上的體外細胞攝取實驗，以及在體大鼠腸灌流實驗研究，證實PEPT1參與并介導了該類化合物的細胞攝取和小腸轉(zhuǎn)運過程。
　　本論文研究的主要結(jié)果：發(fā)現(xiàn)了多個對PEPT1具有很高親和性的二肽序列，并未見文獻報道；首次證實具有該新型結(jié)構(gòu)的化合物能夠被PEPT1識別和轉(zhuǎn)運；通過本論文篩選獲得的高親和性二肽序列修飾，能夠顯著提高其母體化合物的小腸吸收。因此，本論文的研究結(jié)果對擴大靶向PEPT1載體前藥的母體化合物的選擇范圍、二肽修飾的位