CD200-CD200R抑制性軸調(diào)控的巨噬細(xì)胞免疫下調(diào)對(duì)重癥胰腺炎治療作用的研究.pdf

1、目的：
　　重癥急性胰腺炎(Severe Acute Pancreatitis，SAP)是臨床上常見(jiàn)的危重疾病。常從普通胰腺炎發(fā)展而來(lái)，累及胰腺外遠(yuǎn)隔器官，發(fā)生多器官衰竭，死亡率高達(dá)15％-20％。迄今為止，尚無(wú)對(duì)其主動(dòng)預(yù)防、控制的有效途徑。在SAP發(fā)生發(fā)展的病理過(guò)程中，以巨噬細(xì)胞為核心的炎癥在局部級(jí)聯(lián)放大，炎癥介質(zhì)通過(guò)血液循環(huán)向全身擴(kuò)散，激活遠(yuǎn)隔器官中的巨噬細(xì)胞，引發(fā)新一輪炎癥擴(kuò)大。該過(guò)程中細(xì)胞因子過(guò)度釋放、大量炎癥介質(zhì)不斷產(chǎn)生

2、、各種酶類失控活化損傷自身組織，最終造成遠(yuǎn)隔重要器官如肺臟、肝臟等損傷，成為SAP的核心病理特征。如何及時(shí)下調(diào)免疫反應(yīng)，避免炎癥失控成為防治SAP的關(guān)鍵。巨噬細(xì)胞可塑性極強(qiáng)，它不僅能夠啟動(dòng)免疫反應(yīng)，引起炎癥的爆發(fā)，也能夠下調(diào)免疫反應(yīng)，引導(dǎo)炎癥平息。CD200/CD200R抑制性調(diào)控軸是髓樣細(xì)胞系統(tǒng)調(diào)控免疫反應(yīng)的重要途徑，雖至今其作用機(jī)制未明，但以往的多項(xiàng)研究均證實(shí)了外周單核細(xì)胞中CD200/CD200R抑制性軸的異常與慢性中樞神經(jīng)變性密

3、切相關(guān)，且該調(diào)控軸在慢性炎癥和急性變態(tài)反應(yīng)中對(duì)炎癥的顯著控制作用已經(jīng)被多項(xiàng)研究證實(shí)。本課題力圖借助CD200/CD200R抑制性調(diào)控軸對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)控作用，探討其在SAP發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的具體作用和變化規(guī)律，利用CD200/CD200R調(diào)控軸進(jìn)行干預(yù)并考察其對(duì)SAP形成的影響，為防治SAP尋找新靶點(diǎn)。
　　方法：
　　選取體重在20-25g之間的雄性C57bl/6小鼠隨機(jī)分為3組，單純重癥胰腺炎模型組，CD200-Ig處理

4、的模型組，CD200R-Ig處理的模型組。重癥急性胰腺炎模型制作：雨蛙素(Cerulein)50ug/kg腹腔注射，每小時(shí)一次，共注射7次，于最后一次注射雨蛙素時(shí)聯(lián)合注射脂多糖(LPS)10mg/kg。于最后一次注射后的不用時(shí)間點(diǎn)，隨機(jī)處死小鼠，時(shí)間點(diǎn)分別為注射前0h，注射后(30min，3h，12h，24h和72h)。第一部分：提取腹腔巨噬細(xì)胞，利用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)CD200R在不同階段腹腔巨噬細(xì)胞上表達(dá)量的變化同時(shí)為實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)

5、;第二部分：巨噬細(xì)胞分類轉(zhuǎn)化的檢測(cè)：分解提取的巨噬細(xì)胞用以①檢測(cè)炎癥因子IL-10，IFN-γ，IL-4，IL-12，TNF-α，TGF-β1在不同的處理因素及不同時(shí)間點(diǎn)上的表達(dá)量;②分解巨噬細(xì)胞提取行real time RT-PCR檢測(cè)NOS2，Arg-1，sphk-1，retnla在巨噬細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量。根據(jù)上述巨噬細(xì)胞不同類型對(duì)于上述相關(guān)因子表達(dá)量的差異，分析巨噬細(xì)胞的分型;第三部分：提取小鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上的全身各器官，ELISE檢測(cè)

6、炎癥相關(guān)因子IL-10，IFN-γ，IL-4，IL-12，TNF-α，TGF-β1在不同的處理因素及不同時(shí)間點(diǎn)上的表達(dá)量，胰腺HE染色，以及血清淀粉酶在不同組別和時(shí)間點(diǎn)上的濃度，通過(guò)以上數(shù)據(jù)評(píng)估經(jīng)過(guò)CD200/CD200R抑制性軸的調(diào)控造成的巨噬細(xì)胞分型的改變，如何對(duì)重癥急性胰腺炎小鼠全身炎癥反應(yīng)造成的影響。小鼠致死率在三組中的統(tǒng)計(jì)，對(duì)比疾病的不同階段小鼠機(jī)體各器官受累程度的變化，以及干預(yù)后出現(xiàn)的改變。
　　結(jié)果：
　　CD

7、200/CD200R-Ig的處理在炎癥相關(guān)因子的表達(dá)上表現(xiàn)出復(fù)雜的干預(yù)效果：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，CD200/CD200R抑制性軸的激活在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化上起到了顯著的作用，從總體上降低了模型小鼠的致死率，表明CD200-Ig的干預(yù)處理確實(shí)對(duì)巨噬細(xì)胞分型及重癥急性胰腺炎的轉(zhuǎn)歸起到了良性的效應(yīng)，總體上改善病程中小鼠的一般狀態(tài)，并降低了致死率。但具體到小鼠腹腔巨噬細(xì)胞及小鼠體內(nèi)各臟器對(duì)于各個(gè)炎性因子的表達(dá)水平上，CD200/CD200R抑制性軸的激

8、活的作用表現(xiàn)出復(fù)雜的影響效應(yīng)，并非單純抑制或促進(jìn)，而是從總體上抑制了巨噬細(xì)胞分型向抑炎型細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)變，同時(shí)在整體上提高了模型小鼠的致死率;而阻斷抑制性軸的作用也并非都與抑制軸激活組的結(jié)果相反，而是表現(xiàn)出復(fù)雜的效應(yīng)。
　　結(jié)論：
　　CD200/CD200R抑制性軸的干預(yù)在調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞分型轉(zhuǎn)變中起到了重要的作用，對(duì)其作出的激活性處理有效的改善了重癥急性胰腺炎模型小鼠病情的轉(zhuǎn)歸，而對(duì)其作出的抑制性干預(yù)則起到了相反的效果，這些發(fā)