畢赤酵母谷胱甘肽高產(chǎn)工程菌的構(gòu)建.pdf

1、谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸縮合成的三肽，是細(xì)胞或組織內(nèi)存在的重要的非蛋白類含硫物質(zhì)。它具有非常重要的生理功能和臨床應(yīng)用價(jià)值。目前GSH最主要的生產(chǎn)方法是微生物發(fā)酵法，選用的菌株多為酵母。在傳統(tǒng)的誘變育種之后，基因工程定向改造方法使用越來越廣泛。畢赤酵母是使用非常廣泛的真核蛋白表達(dá)體系，它作為表達(dá)宿主具有很多優(yōu)勢(shì)，如具有嚴(yán)密調(diào)控的高效啟動(dòng)子，可以高密度發(fā)酵，外源蛋白不會(huì)過度糖基化等。
　　本文通過在畢赤酵母中以G

2、AP啟動(dòng)子高效表達(dá)來自釀酒酵母的GSH合成酶基因sGSH1和sGSH2，構(gòu)建畢赤酵母谷胱甘肽高產(chǎn)工程菌。因胞內(nèi)GSH的過量積累會(huì)造成GSH合成酶Gshlp受到反饋抑制，從而導(dǎo)致酶活性減低，不能有效提高谷胱甘肽的產(chǎn)量?；诖耍菊撐脑谝延械尼劸平湍腹入赘孰霓D(zhuǎn)運(yùn)體系研究的基礎(chǔ)上，改造了畢赤酵母的谷胱甘肽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，以促使胞內(nèi)積累GSH的外排，減小Gshlp受到的反饋抑制，最終達(dá)到提高GSH總產(chǎn)量的目的。構(gòu)建了一個(gè)多基因改造的工程菌株JC312