石榴不同部位4種多酚類成分檢測方法的研究.pdf

1、近年來，由于石榴中存在的眾多生物活性成分，對石榴的研究與開發(fā)越來越受到全球相關(guān)領(lǐng)域的重視。目前，普遍認(rèn)為多酚類物質(zhì)是石榴中的主要生物活性成分，其中沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸等被認(rèn)為是石榴多酚的主體成分，并在石榴多酚的生物活性中發(fā)揮著重要作用。但目前定量檢測多酚成分的色譜方法主要針對單一成分，且只適用于石榴某一特定部位，同時(shí)檢測不同部位的多種多酚的色譜方法未見報(bào)道。本研究建立了石榴的不同部位包括石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴葉和

2、石榴瓤中沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸4種成分的HPLC測定方法。
　　 本文研究了石榴各部位(石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴葉、石榴瓤)樣品前處理方法及同時(shí)適合檢測沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸4種多酚的色譜條件。結(jié)果表明：石榴皮、石榴籽、石榴葉和石榴瓤經(jīng)干燥粉碎后用等體積甲醇、乙醇、丙酮和水超聲提取、離心后所制備的樣品可采用建立的色譜方法準(zhǔn)確檢測石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量，上述樣品除去有機(jī)溶劑后用乙酸乙

3、酯萃取后可準(zhǔn)確檢測沒食子酸的含量；石榴汁經(jīng)冷凍干燥后超聲溶于甲醇、離心后所制備的樣品可采用建立的色譜方法準(zhǔn)確檢測石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量，石榴汁直接經(jīng)乙酸乙酯萃取后可準(zhǔn)確檢測沒食子酸的含量。
　　 樣品檢測的色譜條件為：選用ArcusEP-C18(250mm×4.6mm，5μm)為色譜柱，以甲醇(A)和0.1％TFA(B)的二元體系為流動(dòng)相，采用梯度洗脫：0-10min，B98％-87%；10-20min，B87％；2

4、0-20.5min，B87％-60％；20.5-42min，B60％，流速1.0mL·min-1；柱溫35℃；進(jìn)樣量10μL；在254nm紫外波長下檢測沒食子酸，石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸均在377nm紫外波長下檢測。
　　 方法學(xué)考察結(jié)果表明，在本文檢測的樣品制備和成分檢測條件下，各部位各待測成分均出現(xiàn)較好的特征峰，且沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸分別在0.020～0.320μg、0.038～0.608μg、0.07

5、4～1.184μg、0.039～0.624μg之間與峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程分別為：沒食子酸y=2353.15x-17496，R=0.9997；石榴皮鞣素y=880.44x-23405.09，R=0.9971；安石榴苷y=403.18x-11971.98，R=0.9968和y=413.95x-12127.42，R=0.9978；鞣花酸y=1112.91x-18658.51，R=0.9994；檢測方法的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加標(biāo)

6、回收率均達(dá)到要求，可以準(zhǔn)確的測定石榴皮、石榴汁、石榴籽、石榴葉和石榴瓤中沒食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量。樣品測定結(jié)果表明，石榴的五個(gè)部位中待測的4種多酚類成分石榴皮中含量最高，石榴瓤次之，石榴汁中含量最低；石榴皮中沒食子酸含量最低，石榴皮鞣素和鞣花酸次之，安石榴苷含量最高，且明顯高于其他三種多酚；石榴汁中沒食子酸、石榴皮鞣素和鞣花酸含量相當(dāng)，安石榴苷的含量最高；石榴籽中沒食子酸與鞣花酸含量相差不多，未檢測到石榴皮鞣素和安石