神經(jīng)節(jié)苷脂GD2：一個分離和鑒定間充質(zhì)干細胞的新型表面分子.pdf

1、目的：利用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建抗臍帶間充質(zhì)干細胞表面分子噬菌體ScFv抗體庫。 方法：收集P3代培養(yǎng)的UC—MSCs免疫BALB/c小鼠，加強免疫后3天，挑取血清抗體滴度高小鼠，取其脾臟細胞，Trizol試劑提取細胞總RNA。然后用mRNA純化試劑盒純化得到mRNA，隨后以mRNA為模板，OligodT(18)為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶M—MLV的催化下合成cDNA第一鏈。RT-PCR擴增全套VH和VL基因片段，將其先后克隆入噬菌粒pSE

2、X81中，構(gòu)建成完整的噬菌體ScFv抗體庫。隨后測定庫容、分析ScFv片段插入重組率以及用BstN1酶切分析抗體庫多樣性。 結(jié)果：構(gòu)建的噬菌體ScFv抗體庫的庫容為2×107cfu，ScFv插入重組率為93％，BstN1酶切圖譜呈不同多樣性。ScFv抗體庫經(jīng)3輪初步篩選后插入重組率達100％，3個克隆出現(xiàn)了相同的酶切圖譜，并且隨著篩選次數(shù)的增加，輸出/輸入比明顯提高，這說明抗體庫得到了特異性富集。 結(jié)論：成功地構(gòu)建了抗臍