產(chǎn)堿性蛋白酶菌株Bacillus pumilus Zk202的選育與酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、堿性蛋白酶在食品、洗滌及制革等行業(yè)中有著廣泛的用途。本論文從鹽堿地土壤中分離篩選出一株產(chǎn)堿性蛋白酶的野生菌株Zk2O2，并進(jìn)行了菌株的鑒定、誘變提高酶活、發(fā)酵條件優(yōu)化、粗酶的提純和酶學(xué)性質(zhì)的初步研究。研究結(jié)果如下： 1.從鹽堿地土樣中分離到一株耐鹽耐堿的芽孢桿菌，其可在NaCI濃度為5％～10％的培養(yǎng)基中生長良好，耐堿性達(dá)到pH值為13，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征研究及16S rDNA序列比對，結(jié)果表明該菌屬芽孢桿菌屬(Baci

2、llus sp.)中短小芽孢桿菌的新的亞種，命名為耐鹽堿短小芽孢桿菌Zk2O2。 2.通過紫外線誘變和化學(xué)誘變進(jìn)行復(fù)合誘變，結(jié)果表明紫外線照射80 sec，DES濃度為2％、處理時間為40 min，菌株產(chǎn)蛋白酶效果最佳。44 h的發(fā)酵液酶活力由81 U/ml提高至321 U/ml。 3.通過單因子試驗和正交試驗，在搖瓶培養(yǎng)條件下對菌株的碳源、氮源、金屬離子、培養(yǎng)溫度、接種量等產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化。得到了菌株的最適產(chǎn)酶條件為

3、：培養(yǎng)基初始pH 9.0，葡萄糖濃度為1.5％，蛋白胨濃度為1.5％，鈣離子濃度為0.01％，接種量2％，培養(yǎng)溫度為36℃，發(fā)酵時間為45 h。在此條件下，堿性蛋白酶的酶活力可達(dá)383 U/ml。 4.粗酶液通過硫酸銨鹽析沉淀、透析除鹽、凝膠柱層析等步驟，對堿性蛋白酶進(jìn)行了純化，純化后的樣品經(jīng)SDS-PAGE得單一酶帶。其比活力達(dá)到了954U/mg,純化了6.13倍，酶活力回收率為27.6％。 5.通過SDS-PAGE對