牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺酶的檢測方法研究.pdf

1、目前,β-內(nèi)酰胺酶作為抗生素分解劑已被非法應(yīng)用到生產(chǎn)中。β-內(nèi)酰胺酶可以分解牛乳中的抗生素殘留使其降到允許量。但是目前為止,尚未有關(guān)于β-內(nèi)酰胺酶本身及其分解產(chǎn)物對人體是否健康的安全性評價標(biāo)準(zhǔn),所以國家規(guī)定生鮮牛乳中不得檢出β-內(nèi)酰胺酶。本論文主要是針對我國牛奶中存在抗生素分解劑殘留,且檢測體系不夠完善的現(xiàn)象,建立了牛奶中β-內(nèi)酰胺酶殘留檢測的微生物杯碟法和酸度計試驗法,并對其進(jìn)行了比較性研究,確定了不同檢測方法的適宜檢測條件,以便為不

2、同規(guī)模的乳品企業(yè)以及質(zhì)量監(jiān)督部門提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。
　　 本文利用微生物杯碟法和靈敏酸度計法對牛乳中的β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行檢測研究,旨在建立可行的檢出限較低、檢測時間較短的檢測方法。
　　 通過抑菌圈試驗,首先對檢測指示菌株進(jìn)行選擇,利用雙層瓊脂法進(jìn)行檢測用培養(yǎng)基的制備,得到適宜的檢測用培養(yǎng)基為抗生素Ⅱ培養(yǎng)基。利用舒巴坦特異性抑制β-內(nèi)酰胺酶的活性,并加入青霉素作為對照,通過比對加入β-內(nèi)酰胺酶抑制劑與未加入抑制劑的樣

3、品所產(chǎn)生的抑菌圈的大小來確定樣品中是否含有β-內(nèi)酰胺酶。
　　 結(jié)果得到對青霉素類藥物絕對敏感的適宜標(biāo)準(zhǔn)菌株為藤黃微球菌,適宜的菌懸液濃度為1×109CFU／mL,適宜的青霉素濃度為0.100mg／mL,適宜的舒巴坦?jié)舛葹?μg／mL,陽性對照用β-內(nèi)酰胺酶的適宜濃度為400U／mL,得到檢出限為4U／mL,檢測所需時間為14～16h。
　　 利用微生物杯碟法對市售牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行檢測,抽取四個廠家的31個產(chǎn)

4、品,得到在系統(tǒng)結(jié)果成立條件下,18個(58.1％)樣品檢測結(jié)果為陽性。
　　 利用酸度計法進(jìn)行牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺酶快速檢測方法的研究,利用β-內(nèi)酰胺酶分解青霉素產(chǎn)酸使牛奶pH值下降的原理,通過單因素試驗和正交試驗得到適宜的酶促反應(yīng)條件為:溫度33℃、青霉素底物質(zhì)量濃度10mg／mL,檢測時間僅為60min。此方法對液態(tài)純牛奶中β-內(nèi)酰胺酶的最低檢出限為8.92U／mL。
　　 利用酸度計法對市售牛奶中殘留的β-內(nèi)酰胺