花臉香蘑發(fā)酵液多糖的分離純化及活性測定.pdf

1、花臉香蘑味道鮮美，色澤美麗，氣味濃香，是一種品質(zhì)優(yōu)良的食用菌，為開發(fā)利用這一資源，對花臉香蘑生物學特性進行了研究，結(jié)果表明:菌絲體生長最佳碳源為玉米面;最佳氮源為黃豆粉;分別加入KH2PO4和K2HPO4時菌絲體生長均較好，但同時加入MgSO40.05％，KH2PO40.1％菌絲體生長情況最好;碳氮比為20/1時，菌絲體達到最佳生長狀態(tài);不添加維生素時菌絲體生長情況最佳;在pH7、pH8、pH9時菌絲體生長狀態(tài)較好;最適光質(zhì)條件為自然光

2、;光量試驗結(jié)果顯示，黑暗條件下菌絲體生長狀態(tài)最佳。經(jīng)正交試驗結(jié)果確定菌絲體生長的最佳固體培養(yǎng)基為:蔗糖20g、豆粉6g、MgSO40.5g，KH2PO41g，蒸餾水1000ml。
　　 為了提高花臉香蘑菌絲體發(fā)酵的產(chǎn)糖率，采用熱水浸提法，以發(fā)酵全液粗多糖得率作為考核指標，通過單因素試驗和正交試驗，對花臉香蘑(Lepistasordida(Fr.)Sing.)菌絲體多糖發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結(jié)果表明，花臉香蘑菌絲體多糖發(fā)酵的最佳條件為

3、:蔗糖20g、蛋白胨4g、硫酸鎂0.5g、磷酸二氫鉀2g，蒸餾水1000ml。
　　 通過單因素試驗和正交試驗，研究了提取溫度、醇沉酒精濃度、pH、提取次數(shù)對多糖提取量的影響。單因素試驗結(jié)果表明:最佳提取溫度、酒精終濃度、pH、提取次數(shù)依次為100℃、80％、12、3次。正交試驗結(jié)果顯示，花臉香蘑發(fā)酵液多糖的最佳提取條件為:溫度100℃、2次、pH12、酒精濃度70‰花臉香蘑發(fā)酵液多糖提取量達4mg/ml。
　　 發(fā)酵液

4、經(jīng)熱水浸提后，醇沉得粗提物LSC，粗提物含有多糖、蛋白質(zhì)、色素、小分子等多種物質(zhì)，為了得到較為純化的多糖樣品，對粗提物進行初步純化和分級純化。初步純化過程包括sevag法除蛋白，雙氧水法除色素，利用透析袋透析除小分物質(zhì)，樣品冷凍干燥，最終得到樣品LSP。利用葡聚糖凝膠G-100柱層析，對樣品LSP進行分級純化，將多糖高峰部分分別合并得LSM1和LSM2。在多糖的提取、分離純化過程中共得四種樣品:粗多糖LSC，經(jīng)初步分離純化的多糖LSP，

5、純多糖LSM1和LSM2。LSC、LSP、LSM1、LSM2在抗腫瘤試驗中做供試樣品。
　　 關于花臉香蘑多糖單糖組分及分子量的研究發(fā)現(xiàn)，花臉香蘑多糖LSM1含有甘露糖、鹽酸氨基葡萄糖、葡萄糖、巖藻糖、木糖5種單糖，摩爾比為1.00∶0.21∶2.24∶0.48∶0.11，據(jù)重均分子量確定其分子量分布在5697.59-1105945.03之間。
　　 LSM2由甘露糖、鹽酸氨基葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、巖藻糖、半乳糖、

6、木糖、阿拉伯糖8種單糖組成，其摩爾比為1.000∶0.017∶0.021∶3.552∶0.114∶0.030∶0.053∶0.151，以重均分子量為依據(jù)判定其分子量分布在2148.27-14165.97。
　　 紅外光譜測定結(jié)果顯示，LSM1和LSM2均為吡喃糖。
　　 核磁共振圖譜分析結(jié)果顯示，LSM1糖苷鍵類型有α構(gòu)型及β構(gòu)型，連接方式主要為1，4-糖苷鍵。LSM2糖苷鍵以α構(gòu)型為主，包含β構(gòu)型，連接方式主要為1，4