四氫嘧啶類化合物ZL-5010抗炎免疫藥理活性研究.pdf

1、目的:以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,合成四氫嘧啶類化合物ZL-5010,探討其抗炎免疫藥理活性。
　　 方法:以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,醋酸為催化劑,在乙醇溶劑中經(jīng)氨基化作用、Mannich反應(yīng)、親核加成反應(yīng)和脫氫環(huán)化反應(yīng)等一步法合成多取代四氫嘧啶類化合物ZL-5010(1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯),經(jīng)制備型硅膠薄層色譜分離純化。MTT法檢測(cè)正常小鼠脾細(xì)胞的代謝活力；EL

2、ISA法檢測(cè)腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素1(IL-1 beta)的含量。采用角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足趾腫脹模型及二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹模型評(píng)價(jià)化合物ZL-5010對(duì)急性炎癥的抑制作用。采用醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體實(shí)驗(yàn)和小鼠熱水浴甩尾模型觀察其鎮(zhèn)痛活性。
　　 結(jié)果:合成的四氫嘧啶類化合物ZL-5010為無色透明油狀物質(zhì),化學(xué)式為:1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯,產(chǎn)率為82.7％,其結(jié)構(gòu)通過1

3、H-NMR和MS得到確證,與文獻(xiàn)報(bào)道相符?；衔颶L-5010在20、10、5μg/ml濃度下均能抑制正常小鼠脾細(xì)胞的代謝活力,平均抑制率分別為64.5％、52.1％、18.9％,與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000,P=0.000,P=0.036),IC50為11.95μg/ml；化合物ZL-5010(25,12.5,6.25μg/ml)均能顯著抑制正常小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均為0.0

4、00)；化合物ZL-5010在25、12.5、6.25μg/ml下均能顯著抑制LPS刺激的小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-1beta,與細(xì)菌脂多糖(LPS)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000,P=0.000,P=0.001)；且有一定的濃度依賴趨勢(shì)。化合物ZL-5010中、高劑量(100、200 mg/kg.b.w)均能明顯抑制二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹,平均耳廓腫脹抑制率分別為42.0％、50.4％,與溶媒對(duì)照組比較有顯著差異(P=0.00

5、0,P=0.000)。化合物ZL-5010高、中(200,100mg/kg)劑量組及Aspirin(200mg/kg)組大鼠平均足趾腫脹度分別為0.044ml、0.069ml、0.090ml,均低于溶媒對(duì)照組大鼠足趾腫脹度,與溶媒對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P=0.002,P=0.009)；化合物ZL-5010低劑量組大鼠平均足趾腫脹度為0.119,低于溶媒對(duì)照組,但與溶媒對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.071)；化合物ZL

6、-5010高劑量(200mg/kg)組在給藥后3h時(shí)對(duì)大鼠足趾腫脹度的抑制率最大,最大平均抑制率為93.2％,化合物ZL-5010中劑量(100mg/kg)組在給藥后3h時(shí)對(duì)大鼠足趾腫脹度抑制率最大,平均抑制率為75.0％,阿司匹林(200mg/kg)組在給藥后5h時(shí)對(duì)大鼠足趾腫脹度抑制率最大,平均抑制率為64.5％。化合物ZL-5010在100、200mg/kg.b.w劑量下和阿司匹林在200 mg/kg.b.w劑量下能均可顯著減少正

7、常小鼠扭體反應(yīng)次數(shù),平均扭體反應(yīng)抑制率分別為46.3％、53.5％、33.5％,與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P=0.000,P=0.000,P=0.004)。
　　 結(jié)論
　　 1.以丁炔二酸二乙酯、環(huán)己胺及甲醛為原料,經(jīng)氨基化作用、Mannich反應(yīng)、親核加成反應(yīng)和脫氫環(huán)化反應(yīng)等合成了四氫嘧啶類化合物ZL-5010(1,3-二環(huán)己基-1,2,3,6-四氫嘧啶-4,5-二甲酸二乙酯),方法具有操作簡(jiǎn)單,原料易得,反應(yīng)條

8、件溫和,反應(yīng)收率高等優(yōu)點(diǎn)。
　　 2.反應(yīng)粗產(chǎn)物經(jīng)制備型硅膠薄層色譜板,以正己烷、乙酸乙酯(V/V為8:1)為展開劑分離純化,方法操作簡(jiǎn)單、易行。
　　 3.化合物ZL-5010對(duì)正常小鼠脾細(xì)胞代謝有抑制作用,可以顯著抑制正常小鼠脾細(xì)胞的代謝活力及細(xì)胞因子TNF-α的分泌,并且能夠抑制LPS刺激的小鼠脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-1beta。
　　 4.化合物ZL-5010可以顯著減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù),提示其具有一