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1、環(huán)境雌激素可以通過(guò)與雌激素受體結(jié)合誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)肝細(xì)胞產(chǎn)生生物標(biāo)志物---卵黃蛋白原(Vitellogenin,Vtg)。本研究利用Vtg與卵黃磷脂蛋白(Lipovitellin,Lv)同免疫原性的特點(diǎn),初步建立了一個(gè)用Lv抗血清檢測(cè)卵黃蛋白原的方法。
將成熟雌性唐魚(yú)在4℃冰浴下取卵巢,10000rpm離心60min,上清液在4%-15%梯度Native-PAGE顯示Lv分子量為314kDa。純化Lv免疫大鼠獲得多克隆抗血清。抗
2、血清與經(jīng)17β-雌二醇(E2)誘導(dǎo)的雄性唐魚(yú)、雌性唐魚(yú)以及唐魚(yú)卵巢的勻漿液能發(fā)生免疫反應(yīng),并且印跡位置與雌性特異蛋白Vtg的位置相當(dāng)。但是抗血清和未經(jīng)E2誘導(dǎo)的雄魚(yú)整體勻漿液并無(wú)反應(yīng),顯示Lv的抗血清與Vtg和Lv兩種蛋白是特異結(jié)合的。結(jié)果表明,唐魚(yú)Lv的抗血清可用于檢測(cè)唐魚(yú)的Vtg。
Native-PAGE分析表明,在E2的誘導(dǎo)下,雄性唐魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生雌性特異蛋白Vtg,并且在體內(nèi)積累。利用Mg2+-EDTA選擇性沉淀和陰離
3、子交換層析的兩步純化方法可分離純化唐魚(yú)Vtg。經(jīng)Native-PAGE鑒定唐魚(yú)Vtg的分子量為440kDa。以唐魚(yú)Lv抗血清為抗體,Lv作為標(biāo)準(zhǔn)品建立間接ELISA,可用于檢測(cè)整體勻漿中Vtg的含量,檢測(cè)濃度為4-256ng/mL,Lv抗血清最佳稀釋度為1:4000,批內(nèi)誤差為2.286%,批間誤差為5.618%,靈敏度為8.775ng/mL。
用不同品牌的奶粉投喂唐魚(yú)90天,用常規(guī)方法在奶粉中未能檢測(cè)出雌激素(雌二醇、雌
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