高產共軛亞油酸的菌種誘變選育及酶學特性研究.pdf

1、共軛亞油酸(CLA)，由于其具有抑制腫瘤、降脂、降膽固醇等促進健康的潛在生理功能，受到國內外學者的廣泛關注。生產富含CLA的發(fā)酵制品，或者制得CLA作為食品添加劑加入食品中，成為食品工業(yè)發(fā)展的熱點。本實驗以菌株篩選、人工誘變處理得到高產菌株，及亞油酸異構酶的分離純化為主要線索，所得實驗結果如下:
　　從市購泡菜中篩得能轉化生成CLA的菌株，其中以菌株Ips929轉化量最大。經紫外波長掃描和Ag+液相色譜分析，發(fā)酵產生CLA的量為3

2、0.913μg/mL，有兩種主要異構體，9c，11t-CLA和10t，12c-CLA。經16s rDNA測定為乳酸桿菌，命名為actobacillus sp.LL-ZSDS001。對該菌進行了生物學特性研究，發(fā)現其最適生長溫度為37℃，培養(yǎng)27h，5％菌株接種量時，CLA總產量最大。當底物濃度為1.35mg/mL時，CLA產量和亞油酸轉化率最大。
　　以篩得的菌株Lactobacillus sp.LL-ZSDS001為原始菌株，進

3、行銫137-γ射線輻照和N離子束誘變共同處理。其中，銫137-γ射線輻照誘變，當輻照劑量為70Gy時，致死率在88.63％-92.80％之間。篩得1菌株，經5次傳代培養(yǎng)后，保持較穩(wěn)定且較強的產CLA的能力，為52.789μg/mL。對上述菌株進行N離子束誘變處理，處理條件為真空度1×10-3Pa，能量20keV，注入劑量20～140×2.6×1013N+/cm2。得菌體
　　存活率曲線為“馬鞍型曲線”，“鞍脊”出現在注入劑量為80

4、、100、120×2.6×1013N+/cm2處。當注入劑量為100、120×2.6×1013N+/cm2時，菌株的正突變率及突變幅度都相對較高。共篩得5株突變幅度高于50％，并有穩(wěn)定性遺傳的菌株，其中以A1轉化生成CLA能力最強，達到118.921μg/mL，比原始菌株的54.234μg/mL提高了119.27％。
　　采用硫酸銨分級沉淀、透析濃縮、葡聚糖凝膠G-100層析處理，對Lactobacillus sp.LL-ZSDS