高產(chǎn)CLA釀酒酵母的篩選、誘變及其亞油酸異構(gòu)酶的分離純化.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid, CLA），是一種不飽和脂肪酸，膳食中攝入的CLA具有抗癌、抗動脈粥樣化、降低膽固醇、促進骨骼生長等功能, 目前，在工業(yè)合成的CLA往往異構(gòu)體復(fù)雜，副產(chǎn)物的殘留的安全性問題。直接添加可食用高產(chǎn)CLA的菌株，或通過該菌株生產(chǎn)高活性的單一CLA異構(gòu)體作為食品添加劑，成為目前研究的熱點。
　　 為了獲得高產(chǎn)CLA的可食用菌株，進一步工業(yè)化生產(chǎn)CLA用于食品添加。本論文自酸奶

2、中篩選產(chǎn)CLA的菌株，經(jīng)18SrDNA鑒定后，利用鹽析、SephadexG-100、DEAE—纖維素離子交換層析，對其亞油酸異構(gòu)酶進行分離純化，利用酶活力和SDS-PAGE進行鑒定后，對篩選出的菌株進行離子束誘變和發(fā)酵條件的優(yōu)化，結(jié)果表明：
　　 (1)從酸奶中篩選出一株產(chǎn)CLA較高菌株，經(jīng)18SrDNA序列鑒定，該菌為釀酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae，亞油酸轉(zhuǎn)化率為3.35％。
　　 (2)經(jīng)

3、60~80％硫酸銨分級沉淀、Sephadex G-100凝膠過濾層析、DEAE—纖維素離子交換層析分離純化后，經(jīng)過酶活力測定和SDS-PAGE分子量檢測，表明獲得純化的亞油酸異構(gòu)酶，其分子量約為68.5kDa。
　　 (3)以篩選的釀酒酵母菌為出發(fā)菌株，經(jīng)離子束誘變、篩選，得到正、負突變菌株，經(jīng)過傳代培養(yǎng)得到一株穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)CLA正突變菌株。
　　 (4)正突變菌株的最優(yōu)發(fā)酵條件為: 培養(yǎng)時間為42h、起始pH值為5.