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文檔簡(jiǎn)介
1、乙酸與甘油是釀酒酵母乙醇發(fā)酵過(guò)程主要的副產(chǎn)物。本研究通過(guò)敲除釀酒酵母Y01乙醛脫氫酶ALD4基因,獲得了ALD4基因缺失的突變體DY01;通過(guò)構(gòu)建反義表達(dá)載體抑制釀酒酵母甘油脫氫酶關(guān)鍵基因GPD1的轉(zhuǎn)錄,以促進(jìn)乙醇發(fā)酵。結(jié)果如下:
1.采用以PCR為基礎(chǔ)的loxP-KanMX-loxP序列組件和Cre/loxP刪除系統(tǒng)刪除了釀酒酵母工程菌Y01乙醛脫氫酶ALD4基因,獲得突變株DY01;釀酒酵母ALD4缺失菌株DY01發(fā)酵
2、液乙醇比出發(fā)菌株釀酒酵母Y01提高了6.88%。
2.通過(guò)構(gòu)建釀酒酵母實(shí)驗(yàn)菌株INVSc1甘油脫氫酶GPD1基因5’UTR反義表達(dá)載體pYES2.0-GPD1,實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組的3-磷酸甘油脫氫酶(GPDH)的比活力最大下降了24.03%;甘油產(chǎn)量含量下降幅度最大達(dá)到了25.43%,而且甘油含量的下降滯后于3-磷酸甘油脫氫酶活性的下降。
3.通過(guò)構(gòu)建釀酒酵母突變株DY01甘油脫氫酶GPD1基因5’UTR反義表達(dá)
3、載體pYES2.0-GPD1/KanMX,獲得釀酒酵母DRY01菌株;釀酒酵母DRY01菌株的甘油脫氫酶(GPDH)的比活力比出發(fā)菌株DY01下降了20.04%;甘油含量下降幅度最大達(dá)到了19.14%;同時(shí),釀酒酵母DRY01發(fā)酵液乙醇含量比釀酒酵母DY01提高了9.74%,比原始菌株Y01乙醇含量提高了14.01%。
建立在酵母高效同源重組機(jī)制的loxP-KanMX-loxP刪除組件與Cre/loxP系統(tǒng)是進(jìn)行釀酒酵母基
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