幾種解脂耶氏酵母表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建及功能驗證.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本實驗構(gòu)建了四種新的解脂耶氏酵母表面展示系統(tǒng),采用來自釀酒酵母的細胞壁蛋白FLO,Pir1和解脂耶氏酵母細胞壁蛋白Y1CWP1分別與來自枯草芽孢桿菌的甘露聚糖酶(man)融合展示在細胞表面。其中細胞壁蛋白FLO的C端與外源蛋白的N端融合,而細胞壁蛋白Pirl和Y1CWP1均是N端與外源蛋白的C端融合;并且我們在融合蛋白的中間插入了HIS×6標(biāo)簽。構(gòu)建的展示系統(tǒng)中有三種(解脂耶氏酵母polg/pINA1296FHM,polg/pINA12

2、96MHP,polg/pINA1296MHY)為單拷貝展示,一種(解脂耶氏酵母polh/pINA1297MHY)為多拷貝展示。采用醋酸鋰化學(xué)轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化,在MD營養(yǎng)缺陷性固體培養(yǎng)基上篩選重組子,并將所挑選的重組子分別通過PCR及間接免疫熒光實驗來驗證;同時我們還研究了這四種展示系統(tǒng)所展示的甘露聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì),以魔芋粉作為底物,測得其反應(yīng)的最佳pH值和溫度分別是6.0和55℃,單拷貝展示重組菌在YPD液體培養(yǎng)基里,28℃,200rpm培養(yǎng)

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