苯妥英鈉隱形脂制體的制備及體內(nèi)外研究.pdf

1、目的:苯妥英鈉(Phenytoin Sodium，PHT-Na)，是抗癲癇大發(fā)作的首選藥物，常用于抗癲癇、抗心律失常和抗輕度高血壓等。但PHT-Na在臨床應(yīng)用時存在有效血藥濃度范圍窄，極易發(fā)生中毒，需要長期、規(guī)律、按時服藥，還有可能誘導(dǎo)腦內(nèi)外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)上調(diào)等問題。
　　 脂質(zhì)體是由磷脂和膽固醇組成的具有雙分子層結(jié)構(gòu)的載體，藥物荷載于其中可延緩藥物代謝和清除，避免在血漿中降解，并能選擇性地增加藥物在預(yù)期作用部位的濃度，從而提高

2、治療指數(shù)。經(jīng)過親水性材料修飾的脂質(zhì)體可逃避網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的捕獲，增加在體內(nèi)的循環(huán)時間，因而也被稱為“隱形脂質(zhì)體”。有些脂質(zhì)體膜修飾劑還具有抑制外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等作用，從而更有利于藥物靶向于腦部，顯著增加腦內(nèi)藥物濃度。因此本課題將PHT-Na制備成脂質(zhì)體以減少其注射的刺激性，并用Tween80和泊洛沙姆407(P407)作為膜修飾劑制備PHT-Na隱形脂質(zhì)體，以期提高血漿藥物濃度，延長其在體內(nèi)的循環(huán)時間，促進(jìn)藥物入腦而增加在腦部位的濃度，達(dá)到減

3、小給藥劑量和次數(shù)、降低副作用的目的。
　　 方法:初步采用薄膜分散法制備PHT-Na脂質(zhì)體(PHT-Na-L)，建立微柱離心法測定脂質(zhì)體包封率。進(jìn)而以包封率為指標(biāo)，分別考察主動載藥法（硫酸銨梯度法和醋酸鈣梯度法）和被動載藥法（逆相蒸發(fā)法和薄膜分散法）制備PHT-Na-L，選擇較好的制備方法。確定最優(yōu)制備方法后，采用單因素實(shí)驗(yàn)考察對PHT-Na-L包封率影響較大的處方和工藝因素，確定大致水平范圍。在此基礎(chǔ)上，以包封率和載藥量為評價

4、指標(biāo)，引入總評歸一值(overall desirability，OD)作為綜合評價指標(biāo)，利用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法篩選最優(yōu)處方。
　　 在最優(yōu)處方的基礎(chǔ)上，通過親水性表面活性劑Tween80和P407修飾制備PHT-Na隱形脂質(zhì)體(PHT-Na-Tween80-L和PHT-Na-P407-L)。采用溶出度儀分別考察PHT-Na溶液(PHT-Na-S)、PHT-Na-L、PHT-Na-P407-L和PHT-Na-Tween80-L

5、的體外釋放行為，繪制累積釋放率對時間曲線，并進(jìn)行模型擬合，初步探討藥物從脂質(zhì)體中釋放的機(jī)理。
　　 大鼠尾靜脈分別注射PHT-Na-S、PHT-Na-L、PHT-Na-P407-L和 PHT-Na-Tween80-L，收集不同時間點(diǎn)的血樣或組織樣品，建立高效液相法測定PHT-Na在血漿和各組織中的濃度，利用Kinetica4.4軟件進(jìn)行房室模型擬合，并采用單因素方差分析比較四種制劑在體內(nèi)過程的差異。
　　 將PHT-Na

6、-L、PHT-Na-P407-L和PHT-Na-Tween80-L放置在不同溫度和光照條件下，測定脂質(zhì)體的滲漏率，觀察外觀和性狀的變化，對脂質(zhì)體的穩(wěn)定性進(jìn)行初步考察。
　　 結(jié)果:Sephadex G-50微柱可以有效分離脂質(zhì)體和游離藥物，空白脂質(zhì)體、PHT-Na溶液和脂質(zhì)體中PHT-Na的過柱平均回收率分別為97.27％、99.59％和103.16％，滿足脂質(zhì)體包封率測定要求。四種制備方法所得PHT-Na脂質(zhì)體包封率的高低順序

7、為:醋酸鈣梯度法＞逆相蒸發(fā)法＞薄膜分散法＞硫酸銨梯度法。單因素考察結(jié)果顯示對PHT-Na-L包封率影響較大的三個因素分別為藥物/磷脂（m/m，X1），膽固醇/磷脂（m/m，X2）和醋酸鈣濃度（mol·L-1，X3），經(jīng)過優(yōu)化后確定最優(yōu)處方為:X1=0.12，X2=0.16，X3=0.12 mol·L-1。按最優(yōu)處方制備PHT-Na-L的包封率和載藥量分別為75.04±0.66％和7.26±0.06％，與預(yù)測值偏差較小，平均粒徑為131.

8、5nm。
　　 體外釋放結(jié)果顯示PHT-Na-S在釋放介質(zhì)中釋藥最快，PHT-Na-L、PHT-Na-Tween80-L和PHT-Na-P407-L體外釋放曲線均符合Weibull模型和一級釋放模型。根據(jù)Weibull模型擬合方程計(jì)算PHT-Na-L，PHT-Na-Tween80-L和PHT-Na-P407-L體外藥物釋放63.2％所需時間td分別為6.59h、6.98h與8.83h，表明PHT-Na-L和PHT-Na-Twee

9、n80-L釋放速率較為接近，而PHT-Na-P407-L釋藥速率相對緩慢。
　　 體內(nèi)房室模型擬合結(jié)果表明PHT-Na-S、PHT-Na-L、PHT-Na-P407-L和PHT-Na-Tween80-L的血藥濃度-時間數(shù)據(jù)均符合權(quán)重為1/C2的二室模型。PHT-Na-S的藥時曲線下面積(AUC)值為4873.38±545.54min·μg·mL-1，消除半衰期t1/2β為163.57±22.09 min，清除率CL為0.88±0

10、.10 mL·min·μg-1。與PHT-Na-S的藥動學(xué)參數(shù)比較，PHT-Na-L、PHT-Na-P407-L和PHT-Na-Tween80-L的AUC分別是PHT-Na-S的1.51、1.74和2.77倍，t1/2β是PHT-Na-S的1.31、1.59和2.87倍，而CL分別為0.64±0.06、0.51±0.03和0.33±0.12 mL·min·μg-1。不同制劑在1h和10h腦內(nèi)藥物濃度的先后順序均為:PHT-Na-Twee

11、n80-L＞PHT-Na-P407-L＞PHT-Na-L＞PHT-Na-S，隱形脂質(zhì)體組具有明顯的腦靶向性。與PHT-Na-L相比，PHT-Na-Tween80-L和PHT-Na-P407-L組在肝、脾等吞噬細(xì)胞較豐富的器官中的藥物濃度有所減小。此外，實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體具有一定的心臟靶向作用。
　　 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:溫度和光照對脂質(zhì)體的穩(wěn)定性影響較大，在4℃和避光條件下貯存時比較穩(wěn)定，為乳白色均勻的混懸液，滲漏率較小。

12、　　 結(jié)論:微柱離心法可以有效分離脂質(zhì)體和游離藥物，適用于PHT-Na脂質(zhì)體包封率的測定。采用醋酸鈣梯度法制備PHT-Na脂質(zhì)體可以顯著提高包封率，應(yīng)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面優(yōu)化法優(yōu)選處方可以有效減少試驗(yàn)次數(shù)，準(zhǔn)確合理地篩選出最優(yōu)處方。所制備的脂質(zhì)體在體外均具有明顯的緩釋性，在體內(nèi)均可不同程度地延長藥物的消除半衰期，增加在體內(nèi)的循環(huán)時間，同時提高了藥物的生物利用度。特別是PHT-Na-Tween80-L能較長時間在腦中維持較高的藥物濃度，對