高溫和氧化條件下酵母細胞應激產生活性物質的研究.pdf

1、本論文對酵母細胞在高溫和氧化條件下的應激反應進行了研究,通過低劑量刺激酵母細胞產生活性衍生物-LYCD,并篩選了耐高溫酵母突變株,開辟了制備LYCD的新途徑.本課題采用呼吸缺陷和正常的酵母菌,分析線粒體功能在酵母氧化應激和熱應激反應中的作用.結果發(fā)現(xiàn),呼吸缺陷酵母抵抗致死劑量氧化劑的能力比正常酵母差,說明線粒體對于細胞抗氧化是必需的.而呼吸缺陷酵母的抗熱能力卻比正常酵母強,說明線粒體對于細胞抗熱具有阻礙作用.通過低劑量的預處理,兩種酵母

2、都對相應致死劑量產生適應性,說明適應性的產生與線粒體功能無關.測定了酵母預處理前后細胞內幾種重要抗氧化劑(GSH、SOD、CAT)的變化,結果表明:兩種預處理都可以使正常酵母細胞中抗氧化劑含量提高.并分析了正常酵母預處理前后細胞內脂質過氧化物一丙二醛(MDA)的含量,發(fā)現(xiàn)兩種預處理后,再在致死條件下作用,MDA的含量降低,細胞的存活率也升高.這不僅說明,預處理使細胞抗氧化水平提高,減少了MDA的積累,細胞增加了對氧化和熱的抗性,更直接說

3、明熱致死與氧化關系密切.將經過H<,2>O<,2>和37℃預處理后的酵母進行破壁,分別得到LYCD<,1>和LYCD<,2>,發(fā)現(xiàn)兩者都對細胞抗氧化具有保護活性.分別對其處理條件進行優(yōu)化,確定了LYCD<,1>的最佳處理條件為:0.4mmol/L H<,2>O<,2>預處理60min,LYCD<,2>的最佳處理條件為:37℃預處理30min.通過紫外誘變篩選了耐高溫酵母突變株,發(fā)現(xiàn)與正常酵母相比,耐高溫突變株對熱和氧化都具有很強的抗性.

4、而且耐高溫酵母提取物也具有保護細胞抵抗氧化的能力.并分析了正常酵母和耐高溫酵母細胞內GSH、SOD、CAT的差異,發(fā)現(xiàn)耐高溫酵母胞內抗氧化水平高于正常酵母菌株.對正常酵母預處理前后蛋白的變化進行了雙向電泳分析,結果表明,有一些蛋白是H<,2>O<,2>和37℃都可以誘導合成的,但也有些蛋白是H<,2>O<,2>或37℃特異性誘導合成的.此外,對耐高溫酵母的蛋白分析后,發(fā)現(xiàn)它與正常酵母相比,產生了很多新的蛋白,其中包括熱激蛋白,也應包括與