液體發(fā)酵制備真菌多糖及多糖水解特性研究.pdf

1、我國(guó)是最早利用真菌防病治病的國(guó)家，真菌也是我國(guó)傳統(tǒng)中藥的重要組成部分。近年來(lái)研究表明，真菌多糖是藥用真菌的主要活性物質(zhì)，它是由真菌產(chǎn)生的一種重要的高分子化合物，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能，還在抗腫瘤、抗病毒、護(hù)肝、抗氧化、降血脂、降血糖等方面具有廣泛的生物學(xué)功效。
　　 分別用PDA基礎(chǔ)培養(yǎng)基、PDA綜合培養(yǎng)基、馬丁氏培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基培養(yǎng)樹舌GA-1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，半合成培養(yǎng)基產(chǎn)糖量最高，樹舌GA-1胞外多糖的產(chǎn)率為61.75

2、mg/100mL,胞內(nèi)多糖的產(chǎn)率為0.51 mg/100mL。樹舌GA-1多糖純化的最優(yōu)純化方案為：用3G/100mL活性炭進(jìn)行脫色，按樣品：氯仿：正丁醇=25:5:1的比例除蛋白，用1.5倍體積乙醇沉淀多糖。按優(yōu)化的方案純化樹舌GA-1粗多糖，純化后粗多糖中多糖的含量由21.6％上升為33.6 ％，多糖損耗率為52.7 ％。
　　 樹舌GA-1搖床發(fā)酵第10天時(shí)胞外粗多糖的產(chǎn)率為0.3486 g/100mL。上罐發(fā)酵108 h

3、后，菌體產(chǎn)率為0.9539 g/100mL，粗多糖產(chǎn)率為0.3043G/100mL。并且，在發(fā)酵過(guò)程中pH、溶氧值、殘?zhí)橇恐饾u下降，而菌體干重逐漸增加，胞外粗多糖在發(fā)酵后期產(chǎn)生。
　　 分析了樹舌GA-1胞外粗多糖中氨基酸的組成后發(fā)現(xiàn)，樹舌GA-1胞外粗多糖含有牛磺酸、門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、組氨酸、精氨酸，共19種氨基

4、酸。其中谷氨酸含量最高為2556.80 mg/100g，其次為門冬氨酸1991.04 mg/100g、甘氨酸1453.35 mg/100g。通過(guò)計(jì)算可知，樹舌GA-1胞外粗多糖中的蛋白質(zhì)含量為13.46 ％。
　　 運(yùn)用生物傳感器測(cè)定6種真菌多糖中的葡萄糖含量，并于柱前衍生化HPLC法的測(cè)定結(jié)果相比較，結(jié)果表明，生物傳感器法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，回收率高，重復(fù)性好，是測(cè)定真菌多糖中葡萄糖含量的良好方法。
　　 繪制樹舌GA-1多

5、糖、靈芝GL-2多糖、蟲草CM-1多糖的部分酸水解曲線，可以看出，同種多糖樣品水解曲線的變化趨勢(shì)幾乎一致，而不同的多糖樣品水解曲線有明顯差異。因此，真菌多糖的水解有一定的規(guī)律性，這種規(guī)律性可以為鑒別多糖提供一種新方法。
　　 通過(guò)柱前衍生化HPLC法分析了6種真菌多糖的單糖組成。將6種真菌的胞外粗多糖及其菌體用1 mol/L的硫酸水解成單糖，用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化，利用高效液相色譜法檢測(cè)各單糖。結(jié)果表