桑黃液體發(fā)酵生產(chǎn)多糖的研究.pdf

1、桑黃(Phellinus baumii)是一種名貴的藥用真菌,其藥用價值已得到了廣泛的關(guān)注；傳統(tǒng)上,桑黃的多糖是從子實體中提取,但是,由于其生長環(huán)境的特殊性,在自然界中形成的子實體稀少,桑黃子實體的人工栽培尚處于起步階段,而液體發(fā)酵所產(chǎn)菌絲體具有培養(yǎng)周期短、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、便于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點,且菌絲體同樣具有顯著的藥理活性,通過體內(nèi)和體外的活性實驗證明了液體培養(yǎng)桑黃菌絲體提取物具有細胞介導的免疫性、大范圍的免疫刺激、抗腫瘤活性、降血糖、

2、保護肝臟等作用。胞內(nèi)多糖是菌絲體中的重要活性成分,所以胞內(nèi)多糖產(chǎn)量高低決定了桑黃菌絲體藥用價值的高低；胞外發(fā)酵液中也舍有一些被證實有藥理作用的活性多糖和蛋白,因此胞外發(fā)酵液的活性成分也是桑黃藥用價值的一項重要指標。 本研究先從桑黃菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化著手,根據(jù)菌絲干重(DW)和胞內(nèi)多糖(IPS)這兩項指標篩選出最優(yōu)培養(yǎng)基組合。首先設定了初始pH的篩選,碳源的篩選、氮源的篩選、碳氮比的篩選這四種單因素實驗,從中取各因素的三個

3、較好水平進入下一步的正交試驗。用L27(313)表進行四因素三水平正交試驗,篩選出了較好的桑黃胞內(nèi)多糖高產(chǎn)液體發(fā)酵培養(yǎng)基,產(chǎn)量達到2.70 g/L,其配方為初始pH5.0、黃豆粉、可溶性淀粉、C/N為1:1;通過直觀分析和方差分析,胞內(nèi)多糖含量的主控因素初始pH(A)與菌絲干重的主控因素氮源(B)之間是相互獨立的,兩者結(jié)果的相關(guān)分析得出f=-0.16(P>0.05),表明胞內(nèi)多糖含量與菌絲干重之間沒有可靠的相關(guān)性。 本研究其次從

4、菌株選育著手,以桑黃(Phellinus baumii)菌株為原始出發(fā)菌株P(guān)B,篩選出其菌絲原生質(zhì)體制備和再生的最佳條件,采用紫外線誘變方法對其菌絲原生質(zhì)體進行誘變,獲得一株胞內(nèi)多糖高產(chǎn)誘變株129＃,生長速度比PB快,其菌絲干重從PB的1.95g/L升至2.77 g/L,胞內(nèi)多糖含量由PB的7.83％升至9.95％,且具有良好的遺傳穩(wěn)定性：采用SRAP技術(shù)對原始出發(fā)菌株P(guān)B和誘變株129＃之間的遺傳差異進行了研究,結(jié)果表明,原始出發(fā)菌