溫特曲霉PZ322產(chǎn)巖藻多糖酶的液態(tài)發(fā)酵條件研究.pdf

1、巖藻多糖和低分子量巖藻多糖(LMWF)具有多種生物學(xué)活性。低分子量巖藻多糖也具有很強(qiáng)的生物學(xué)活性，并且避免了巖藻多糖的抗原性和毒副作用。巖藻多糖酶可部分降解巖藻多糖，得到LMWF并且保留硫酸基團(tuán)。另外LMWF還可以作為解析巖藻多糖結(jié)構(gòu)的工具。因此，對(duì)巖藻多糖酶的研究具有十分重要的意義。本文主要研究了巖藻多糖酶產(chǎn)生菌的篩選，鑒定及液態(tài)發(fā)酵。
　　 對(duì)我國(guó)廈門(mén)海域采集的不同樣品（包括海水，海砂，海泥，軟體動(dòng)物，海苔，朽木等），用稀釋

2、平板法分離海洋真菌，共分離到真菌129株。以巖藻多糖為唯一碳源，經(jīng)過(guò)初篩和復(fù)篩得到28株巖藻多糖酶產(chǎn)生菌，占所篩真菌數(shù)的21.7％。海泥和朽木中分離出來(lái)的具有巖藻多糖酶活性真菌所占比例最高，各占33.3％。其中菌株P(guān)Z322的巖藻多糖酶產(chǎn)量最高，酶活力為3.83 IU/ml，且發(fā)酵性能較穩(wěn)定，被確定為下一步研究的出發(fā)菌株。
　　 然后我們對(duì)該菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定，初步鑒定其為曲霉屬的成員。同時(shí)菌株P(guān)Z322 ITS序列與從GEN

3、BANK獲取的序列比對(duì)，其中較有鑒定意義的是序列GU183175.1(Aspergillus fumigatus isolate HF11)和AY373884.1(Aspergillus wentii strain ATCC1023)，與該菌株相似序列達(dá)到100％。Aspergillus fumigatus的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)為單層，而菌株P(guān)Z322的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果卻是雙層產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)，因此，我們將此菌株鑒定為 Aspergillus wentii(

4、PZ322)。目前文獻(xiàn)資料上還沒(méi)有溫特曲霉產(chǎn)巖藻多糖酶的報(bào)道。
　　 為了提高巖藻多糖酶的產(chǎn)量，對(duì)其液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PZ322產(chǎn)巖藻多糖酶的較優(yōu)培養(yǎng)基為(％)：麩皮5，海帶粉2，(NH4)2SO40.4，起始pH調(diào)為6.5。培養(yǎng)條件為250ml三角瓶裝液量為80ml，接種量為5％，搖床轉(zhuǎn)速為180rpm，溫度為28℃，培養(yǎng)48h時(shí)，酶活力達(dá)到6.90 IU/ml。
　　 為進(jìn)一步

5、提高巖藻多糖酶的產(chǎn)量，我們對(duì)菌株P(guān)2322進(jìn)行了三次低能量(15 Kev)的氮離子注入誘變。結(jié)果表明，較低的注入劑量(30單位)下，有利于突變菌株的產(chǎn)生。經(jīng)過(guò)兩輪誘變后，篩選出較高產(chǎn)菌株2041，液態(tài)發(fā)酵48h后酶活力為8.89IU/ml。
　　 最后我們對(duì) Aspergillus wentti PZ322菌株巖藻多糖酶的分離純化進(jìn)行了初步的探索。通過(guò)粗酶液前處理，經(jīng)10萬(wàn)Da，5萬(wàn)Da，3萬(wàn)Da，1萬(wàn)Da超濾膜分級(jí)成5個(gè)級(jí)分，