乳牛肝菌液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)多糖的研究.pdf

1、乳牛肝菌(Suillus bovinus)是一種珍稀食用菌,味道鮮美且營養(yǎng)豐富。作者所在實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明乳牛肝菌含有一種具有多種生理活性的成分——茶氨酸,并且建立了乳牛肝菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的方法。目前,國內(nèi)外尚未見到有關(guān)乳牛肝菌液態(tài)深層發(fā)酵產(chǎn)多糖方面的報(bào)道,對(duì)乳牛肝菌多糖的研究也未見到。鑒于此,本論文對(duì)乳牛肝菌發(fā)酵產(chǎn)多糖的相關(guān)問題進(jìn)行了初步的研究。首先以乳牛肝菌菌株為材料,采用液體發(fā)酵技術(shù),研究了培養(yǎng)基和發(fā)酵條件對(duì)菌絲體生物量和胞外多糖

2、產(chǎn)量的影響。然后對(duì)通過發(fā)酵培養(yǎng)得到的乳牛肝菌菌絲體多糖和胞外多糖進(jìn)行了提取和分離,并對(duì)熱水提取菌絲體多糖影響因素進(jìn)行了考察,通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了菌絲體多糖提取工藝。對(duì)提取出的菌絲體多糖和胞外多糖進(jìn)行了初步的純化,進(jìn)行了紫外掃描和紅外光譜分析。最后研究了乳牛肝菌多糖對(duì)胃癌細(xì)胞MGC-803的抑制作用。以期為乳牛肝菌發(fā)酵多糖的進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果有： 1.以發(fā)酵獲取的菌絲體生物量和胞外多糖產(chǎn)量為指

3、標(biāo),通過Plackett-Burman(PB)設(shè)計(jì)篩選發(fā)酵培養(yǎng)的主要影響因素,確定了乳牛肝菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基主要影響因素為玉米粉(P=0.018)、葡萄糖(P=0.020)、MgSO4·7H2O(P=0.040)和葡萄糖 (P=0.018)、玉米粉(P=0.019)、MgSO4·7H2O(P=0.049)。初步優(yōu)化得到的培養(yǎng)基組成為：葡萄糖30.00 g/L,玉米粉20.00 g/L,蔗糖15.00g/L,酵母粉4.67 g/L,KH2P

4、O4 4.50 g/L,MgSO4·7H2O1.50g/L,CaCO3 1.33 g/L,VB1 15 mg/L2.在PB設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以胞外多糖產(chǎn)量為指標(biāo),運(yùn)用響應(yīng)面法(Response Surface Methodology, RSM)的Box-Behnken中心組合設(shè)計(jì)對(duì)篩選出的重要影響因素進(jìn)一步優(yōu)化,確定了乳牛肝菌發(fā)酵產(chǎn)多糖最適宜的發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖37.58g/L,玉米粉28.11 g/L,蔗糖15.00 g/L,酵母粉4

5、.67 g/L,KH2PO4 4.50g/L,MgSO4·7H2O 1.307 g/L,CaCO3 1.33 g/L,VB1 15 mg/L。 3.通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),確定了乳牛肝菌液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的最優(yōu)條件為：搖瓶裝液量60ml/250ml、搖床轉(zhuǎn)速180 r/min、發(fā)酵培養(yǎng)6天。 4.通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),確定了水法提取發(fā)酵菌絲體多糖的最佳提取工藝為：料液比1:40,浸提溫度為100℃,提取時(shí)間4小時(shí)。采用2

6、次提取可以獲得較好的多糖提取得率；將浸提液濃縮4倍,加3倍體積95％乙醇進(jìn)行沉淀可以得到最大的多糖沉淀率。 5.乳牛肝菌發(fā)酵菌絲體多糖和胞外多糖初步純化的結(jié)果顯示菌絲體多糖含有3種多糖組分；胞外多糖含有2種多糖組分。通過紫外掃描顯示初步純化的菌絲體多糖和胞外多糖均較純,不含核酸、蛋白和色素；紅外光譜分析顯示菌絲體多糖和胞外多糖都具有多糖特征吸收峰,且胞外多糖的構(gòu)型主要為β-型吡喃環(huán)。 6.鏡下觀察和MTT法檢測(cè)的結(jié)果表明乳牛肝菌