沙棘葉多糖的提取、功能及其分子修飾的研究.pdf

1、本文以沙棘葉多糖為研究對(duì)象,系統(tǒng)地研究了其提取、分離純化以及分子修飾(硫酸酯化、羧甲基化和金屬離子螯合作用)的工藝條件。通過(guò)對(duì)沙棘葉多糖的抗氧化性及分子修飾前后的抑菌功能進(jìn)行了初步研究,為其在食品、醫(yī)藥及保健品等方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 (1)沙棘葉多糖的提取工藝研究。以沙棘葉多糖得率為指標(biāo)對(duì)水提、微波輔助及超聲波輔助三種提取方法進(jìn)行比較,并對(duì)超聲波提取法進(jìn)行了響應(yīng)面分析優(yōu)化得到最佳提取工藝條件,即當(dāng)液固比為

2、52.5:1、超聲功率為607.1W、超聲時(shí)間為42.3min時(shí),此條件下多糖得率的預(yù)測(cè)值為7.74％,驗(yàn)證值為7.68％.
　　 (2)沙棘葉多糖的最佳脫蛋白法是Sevag法(氯仿:正丁醇=4:1),其去蛋白六次后蛋白質(zhì)的清除率可達(dá)78.96％,此時(shí)多糖的損失率僅為33.75％。
　　 (3)沙棘葉多糖經(jīng)過(guò)除蛋白和脫色,除去小分子雜質(zhì),為精制的沙棘葉多糖(SJ),經(jīng)DEAE-52離子交換層析的分離純化,得到了3個(gè)級(jí)分,

3、分別為SJ-1、SJ-2和SJ-3。各級(jí)分經(jīng)紫外光譜法和凍融分析可知3個(gè)級(jí)分均為單一組分,其含量分別為11.64％、77.67％、10.69％。經(jīng)氣相色譜分析,沙棘葉多糖SJ-2級(jí)分是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五種單糖組成,其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為鼠李糖15.18％、阿拉伯糖13.22％、甘露糖20.38％、葡萄糖33.03％、半乳糖18.19％。
　　 (4)沙棘葉多糖有很好的體外抗氧化能力(羥自由基、超氧陰離子的清除

4、力,總抗氧化活性),當(dāng)濃度為1200μg·mL-1時(shí),對(duì)O2·-的清除率可達(dá)100％,比同濃度的抗血壞酸溶液要高18.92％。此外通過(guò)急性毒理試驗(yàn)研究證明沙棘葉多糖屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí),其LD50＞15000mg·kg-1·bw-1,MTD＞30000mg·kg-1·bw-1·d-1。
　　 (5)確定了沙棘葉多糖的最佳硫酸酯化工藝:酯化溫度60℃,氯磺酸與吡啶的體積比3:1,酯化時(shí)間為2.5h,在此條件下的多糖酯化取代度為0.51.

5、紅外光譜法檢測(cè)顯示硫酸基與SJ-2形成硫酸酯化合物。
　　 (6)確定了沙棘葉多糖的最佳醚化工藝:異丙醇濃度為80％,氫氧化鈉與一氯乙酸的摩爾比2.5:1,作用時(shí)間3h,作用溫度50℃,在此條件下的多糖羧甲基化取代度為0.73。
　　 (7)確定了沙棘葉多糖的最佳金屬離子螯合工藝:多糖與鋅離子質(zhì)量比5:1,鋅離子的初始濃度為6mg/mL,螯合時(shí)間為8h,此條件下的最佳螯合率為73.89％。
　　 (8)瓊脂平板擴(kuò)