多花黃精多糖提取分離、分子量測定及其粗多糖的初步藥效研究.pdf

1、本課題以多花黃精干燥根莖為原料，對黃精多糖進(jìn)行了提取、分離及分子量測定研究。進(jìn)行了多花黃精粗多糖的提取，并對提取的粗多糖進(jìn)行了初步藥效研究。
　　建立測定多糖含量的蒽酮硫酸—紫外分光光度法。以黃精多糖得率為評價(jià)指標(biāo)，對水煎煮、水溫浸和微波水溶液提取方法進(jìn)行篩選，多糖得率分別為:21.6％、6.5％、17.9％，故選擇水煎煮法為本研究的提取方法。以黃精多糖得率為評價(jià)指標(biāo)，以提取次數(shù)、提取時(shí)間和用水量為正交實(shí)驗(yàn)的主要因素，每個(gè)因素設(shè)置

2、三個(gè)水平，進(jìn)行L9(3)4正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選提取工藝參數(shù)，并對影響醇沉純化工藝的固液比和醇沉濃度參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)篩選出最佳工藝條件為:10倍水煎煮3次，每次2h，濃縮至固液比為1∶1，醇濃度為75％。本提取純化工藝所得黃精粗多糖得率約為28％。
　　以蛋白脫除率和多糖保留率為評價(jià)指標(biāo)，采用加權(quán)綜合評分法比較Sevage法和三氯乙酸法(TCA)法的脫蛋白，結(jié)果表明Sevage法經(jīng)6次萃取，蛋白脫除率可達(dá)72.7％，多糖保留率為84.6％

3、。黃精粗多糖經(jīng)脫蛋白、脫色、透析后，再上DEAE-52纖維素柱，用水、0.1mol/L、0.5mol/L的氯化鈉洗脫，得到黃精多糖PCPd-1、PCPd-2、PCPd-3，三種組分再分別經(jīng)Sephadex G-150柱純化，得到黃精多糖PCPs-1、PCPs-2、PCPs-3，經(jīng)高效凝膠色譜法檢測，均呈單一對稱峰，說明樣品為均一多糖。
　　黃精多糖PCPs-1、PCPs-2、PCPs-3在紫外光譜260nm及280nm處無明顯吸收

4、，說明不含有核酸和蛋白質(zhì)。在紅外光譜顯示具有一般多糖類物質(zhì)的特征吸收峰，在889.1 cm-1、891.1 cm-1、891.1 cm-1處有吸收峰，表明該多糖糖苷鍵為β構(gòu)型。針對黃精多糖進(jìn)行了初步薄層鑒別，結(jié)果表明，PCPs-1和PCPs-2分別含有葡萄糖和半乳糖，黃精多糖PCPs-3主要含有半乳糖。采用HPGPC-ELSD法測定黃精多糖分子量，色譜柱為Shodex OHpak SB-804 HQ(8.0×300mm)，流動(dòng)相為0.1

5、 mol/L醋酸錢，流速0.8mL/min，柱溫30℃。測定結(jié)果:黃精多糖PCPs-1，PCPs-2，PCPs-3數(shù)均分子量分別為5640、4760、4380道爾頓，重均分子量分別為13000、13900、12200道爾頓，分布系數(shù)分別為2.31、2.93、2.80。
　　采用水提醇沉的方法提取黃精粗多糖，并通過溶劑法把多糖粗分為黃精粗多糖1(CPPC-1)和黃精粗多糖2（CPPC-2）兩個(gè)部分，并對兩個(gè)部分進(jìn)行了初步的體外增強(qiáng)免

6、疫力實(shí)驗(yàn)。采用MTT法觀察了黃精粗多糖CPPC-1和CPPC-2對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖作用的影響，同時(shí)采用Griess法測定了黃精粗多糖CPPC-1和CPPC-2樣品誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞生成NO的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:黃精粗多糖CPPC-1和CPPC-2對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用沒有協(xié)同效應(yīng);對脾淋巴細(xì)胞有一定的增殖作用，黃精粗多糖在CPPC-1為50 ug/mL、黃精粗多糖CPPC-2為500ug/mL時(shí)其最大促進(jìn)率分別達(dá)20.3％和13.3