無血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細胞的研究.pdf

1、研究背景：
　　 近年來結(jié)腸癌的發(fā)病率逐漸上升，因治療效果有限，臨床上轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)常見。腫瘤干細胞被視為腫瘤發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源，其生長機制和生物學特性的進一步闡明，將為結(jié)腸癌的診斷、治療、預(yù)防和病情評估帶來新的希望。而如何有效地分離純化結(jié)腸癌干細胞是首要面臨的技術(shù)難點。
　　 目的：
　　 通過無血清培養(yǎng)法初步富集人結(jié)腸癌Caco-2干細胞，并探討其可行性，以期為Caco-2干細胞的有效分選方法提供一種思

2、路，為結(jié)腸癌的研究構(gòu)建一種新的干細胞模型。
　　 方法：
　　 將人結(jié)腸癌Caco-2細胞接種于無血清培養(yǎng)基中以初步富集Caco-2干細胞，觀察其生長增殖過程，通過含血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基交替培養(yǎng)誘導(dǎo)其分化，利用5-氟尿嘧啶、奧沙利鉑驗證其耐藥性，行免疫熒光染色檢測結(jié)腸癌干細胞特異性標記物CD133的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.一部分Caco-2細胞在無血清培養(yǎng)基中逐漸增殖形成懸浮的腫瘤干細胞球，而

3、一部分不能耐受無血清環(huán)境的細胞則死亡。
　　 2.Caco-2腫瘤干細胞球能在無血清培養(yǎng)基中連續(xù)傳代，傳代后球體生長快，數(shù)量多，形態(tài)規(guī)則。
　　 3.Caco-2腫瘤干細胞球重懸于含血清培養(yǎng)基后，球體逐漸發(fā)生解聚，分化成貼壁生長的單層細胞。
　　 4.Caco-2腫瘤干細胞球在含血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基中進行交替培養(yǎng)時，能在單層貼壁細胞和腫瘤干細胞球之間發(fā)生相應(yīng)轉(zhuǎn)化。
　　 5.將Caco-2腫瘤干細胞球

4、消化成單細胞后，予以無血清培養(yǎng)聯(lián)合化療藥物干預(yù)顯示，一部分細胞被殺死，一部分細胞存活下來并重新增殖成球，且相對于單純采用無血清培養(yǎng)的無藥物干預(yù)組而言，其Caco-2腫瘤干細胞球生長快，數(shù)量多，體積大。
　　 6.無藥物干預(yù)組、5-氟尿嘧啶干預(yù)組、奧沙利鉑干預(yù)組、5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組形成的Caco-2腫瘤干細胞球的數(shù)目分別為:（10.0±1.15）個/孔、（16.1±1.52）個/孔、（17.5±1.43）個/孔、（18

5、.8±1.14）個/孔，無藥物干預(yù)組的成球數(shù)分別低于3個實驗組(P＜0.01)，5-氟尿嘧啶干預(yù)組的成球數(shù)分別低于奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.05)和5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.01)，奧沙利鉑干預(yù)組的成球數(shù)低于5-氟尿嘧啶聯(lián)合奧沙利鉑干預(yù)組(P＜0.05)。
　　 7.免疫熒光染色顯示Caco-2腫瘤干細胞球呈現(xiàn)出橙紅色熒光，即為CD133陽性表達，而陰性對照未發(fā)現(xiàn)免疫熒光著色。
　　 結(jié)論：
　　 1

6、.人結(jié)腸癌Caco-2細胞可以在無血清培養(yǎng)基中形成懸浮的腫瘤干細胞球。
　　 2.Caco-2腫瘤干細胞球具有自我更新、不斷增殖、分化和耐藥的能力。
　　 3.無血清培養(yǎng)聯(lián)合化療藥物干預(yù)比單純采用無血清培養(yǎng)有利于Caco-2干細胞的富集，奧沙利鉑的富集效率高于5-氟尿嘧啶，二者聯(lián)用的富集效率高于單藥。
　　 4.Caco-2腫瘤干細胞球可以表達結(jié)腸癌干細胞特異性標記物CD133。
　　 5.通過無血清培養(yǎng)