67LR介導(dǎo)的EGCG，YIGSR對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3細(xì)胞毒性的影響及其分子機(jī)制.pdf

1、前列腺癌是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。在歐美國(guó)家，前列腺癌導(dǎo)致的死亡率僅次于肺癌，位居第二。我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率雖然低于西方國(guó)家，但隨著人口老齡化以及飲食習(xí)慣的改變，前列腺癌的發(fā)病率在我國(guó)呈逐年上升的趨勢(shì)。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechingallate，EGCG)是綠茶兒茶素的主要組成成分。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究表明無論是雄激素依賴型前列腺癌細(xì)胞還是非雄激素依賴型前列腺癌細(xì)胞，在EGCG處理后細(xì)胞數(shù)量都明顯減少，并且

2、呈劑量依賴效應(yīng)關(guān)系。 近年來，EGCG與金屬離子的相互作用及其生物學(xué)效應(yīng)開始成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。金屬離子能夠影響EGCG的生物學(xué)活性，使其生理功能發(fā)生改變。鋅、鎘離子是重要的環(huán)境因子，與前列腺癌發(fā)生密切相關(guān)，鋅、鎘離子的平衡在前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本文利用前列腺癌細(xì)胞PC-3培養(yǎng)體系研究了EGCG與鋅、鎘離子相互作用對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3生長(zhǎng)的影響并探討了其作用的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EGCG，Zn2+，Cd

3、2+處理后PC-3細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移受到抑制，同時(shí)80μmol/LZn2+，20μmol/LCd2+可以增強(qiáng)EGCG的抗癌活性，80μmol/LEGCG+80μmol/LZn2+，80μmol/LEGCG+20μmol/LCd2+處理后細(xì)胞的存活率均低于EGCG單獨(dú)處理。67kDa層粘連蛋白受體(67LR)是EGCG抗癌作用的直接受體，在EGCG抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)中起重要作用。 本文采用RT-PCR、免疫組化和免疫熒光方法研究不同處理對(duì)

4、67LR表達(dá)的影響，結(jié)果表明Zn2+，Cd2+處理后67LR的表達(dá)增加，因此我們推斷Zn2+，Cd2+可通過上調(diào)67LR的表達(dá)為EGCG提供更多作用的靶位點(diǎn)，從而增強(qiáng)EGCG對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3的毒性作用。利用ESR檢測(cè)不同處理對(duì)細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)的影響實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EGCG，Zn2+，Cd2+處理后膜蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生解聚，膜蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)趨于松散，同時(shí)在Zn2+，Cd2+存在下EGCG對(duì)細(xì)胞膜蛋白結(jié)構(gòu)的損傷增強(qiáng)。此外，我們還研究了EGCG，Cd2+

5、對(duì)PC-3細(xì)胞線粒體功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGCG、Cd2+可以與PC-3細(xì)胞線粒體作用并影響線粒體功能，Cd2+在抑制ATP合成、降低線粒體膜電位、激活Caspase-9等方面增強(qiáng)了EGCG的作用。 層粘連蛋白中β1鏈Ⅱ功能區(qū)末端的酪氨酸-異亮氨酸-甘氨酸-絲氨酸-精氨酸YIGSR序列，是67LR特異性識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)。本文研究發(fā)現(xiàn)YIGSR顯著的抑制前列腺癌細(xì)胞PC-3的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，并呈劑量依賴性；YIGSR可與PC-3細(xì)胞線

6、粒體作用并影響線粒體功能，50μg/mLYIGSR處理后，細(xì)胞線粒體功能發(fā)生改變，線粒體膜電位下降，細(xì)胞內(nèi)ATP含量降低，Caspase-9活性顯著增加。MTT和平板克隆實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，YIGSR和EGCG共同處理PC-3細(xì)胞24h，EGCG的抗癌活性降低，YIGSR和EGCG共同處理后細(xì)胞的存活率高于EGCG單獨(dú)處理時(shí)的細(xì)胞的存活率。本文首次利用分子對(duì)接方法對(duì)EGCG、YIGSR與67LR作用位點(diǎn)進(jìn)行模擬，結(jié)果表明YIGSR，EGCG與67