PPARγ調(diào)控DsbA-L促進脂聯(lián)素高聚體分泌的研究.pdf

1、二硫鍵A氧化還原類似蛋白(DsbA-L)是新被鑒定的幫助脂聯(lián)素的折疊和分泌的分子伴侶蛋白。脂聯(lián)素是一種有益的脂肪因子。在肥胖人體中，DsbA-L水平下降，伴隨著血清中脂聯(lián)素水平的下調(diào)，特別是多聚體脂聯(lián)素形式。在嚙齒動物和人體研究中，核受體過氧化物激酶受體PPARγ的激動劑可以通過激活PPARγ，上調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白的水平，形成一個高效的蛋白折疊環(huán)境，從而增加血清中脂聯(lián)素的循環(huán)量。此外，DsbA-L作為一個新的PDI家族的成員之一，他獨特的

2、促進脂聯(lián)素分泌的機制仍未知。
　　本實驗采用雙熒光素酶報告系統(tǒng)，細胞轉(zhuǎn)染，基因敲減，實時定量PCR，蛋白質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)，染色質(zhì)免疫共沉淀，通過PPARγ對脂聯(lián)素多聚體形式的促進作用，分析PPAR對DsbA-L的作用，進而研究DsbA-L在PPARγ調(diào)控脂聯(lián)素多聚體形式向胞外分泌中的重要作用。結(jié)果如下，
　　1.基因轉(zhuǎn)染，蛋白質(zhì)免疫印跡分析PPARγ促進胞外脂聯(lián)素多聚體水平，利用基因表達，基因敲減，實時定量PCR及蛋白質(zhì)免疫

3、印跡技術(shù)驗證PPARγ上調(diào)脂聯(lián)素及脂聯(lián)素折疊分泌相關(guān)分子伴侶蛋白。
　　2.生物信息學(xué)分析DsbA-L啟動子存在PPRE，利用基因共轉(zhuǎn)染，雙熒光素梅報告系統(tǒng)，啟動子突變截斷，及染色質(zhì)免疫共沉淀證實PPRE結(jié)合到DsbA-L啟動子上促進DsbA-L的表達。
　　3.基因敲減，通過蛋白質(zhì)免疫印跡分析成熟分化的脂肪細胞中，DsbA-L及PPARγ水平降低會下調(diào)胞外多聚體脂聯(lián)素的水平?；蜣D(zhuǎn)染分析驗證DsbA-L對胞外脂聯(lián)素多聚體形