TNF-α對脂聯素多聚化修飾及分泌調控的研究.pdf

1、脂聯素是哺乳動物循環(huán)系統(tǒng)中含量最豐富的一種脂肪細胞因子。除了調節(jié)機體能量平衡外，脂聯素還具有增強胰島素敏感性，抵抗動脈粥樣硬化和抵抗炎癥的作用。脂聯素過表達可降低血糖和改善胰島素抵抗。相反，脂聯素基因敲除可導致胰島素抵抗和葡萄糖不耐受。肥胖個體血液中脂聯素水平呈顯著下降。
　　脂聯素在循環(huán)系統(tǒng)中主要以三種復合體的形式存在:三聚體(LMW)，六聚體(MMW)，和含有18-36個脂聯素單體的高聚體(HMW)形式，HMW在總脂聯素中的含

2、量決定胰島素的增敏能力。脂聯素的多聚化依賴于分子間二硫鍵的形成，而蛋白質二硫鍵的形成發(fā)生在內質網中，內質網分子伴侶ERO1-Lα，DsbA-L和ERp44在脂聯素多聚體尤其是高聚體的組裝和分泌過程中發(fā)揮重要的作用。
　　作為一種內分泌器官，脂肪組織可分泌大量的細胞因子，如TNF-α，leptin，IL-6，和visfatin等。肥胖個體中巨噬細胞向脂肪組織的浸潤可促進脂肪組織炎癥環(huán)境的形成。TNF-α主要由成熟的脂肪細胞和巨噬細胞

3、分泌，在糖脂代謝中發(fā)揮重要作用，是炎癥導致的胰島素抵抗過程中的一個重要的細胞因子。
　　臨床研究證實，盡管脂聯素和TNF-α作為一種典型的脂肪組織分泌因子，但在肥胖和糖尿病患者的循環(huán)系統(tǒng)中，兩者的水平則呈顯著負相關。這是否因為TNF-α通過旁分泌或自分泌的方式直接調控脂聯素的多聚化和分泌，已成為該領域關注的焦點。本文通過離體細胞、高脂飲食和重組TNF-α處理的活體模型，系統(tǒng)的研究了TNF-α對脂聯素多聚化和分泌調控的分子機制，旨在

4、回答脂聯素和TNF-α同屬脂肪組織分泌因子，但在肥胖患者循環(huán)系統(tǒng)中為何呈現顯著的消漲關系。研究結果如下:
　　1.通過高脂飲食和腹腔注射TNF-α的方法建立了胰島素抵抗表型的小鼠模型，通過對小鼠模型各生理指標的檢測和比較發(fā)現:高脂飼喂和TNF-α注射小鼠血糖和血漿胰島素含量均顯著升高;胰島素抵抗指數分析表明，兩組小鼠都表現出明顯的胰島素抵抗;與對照組相比，高脂飲食和腹腔注射TNF-α小鼠循環(huán)系統(tǒng)中脂聯素的分泌量顯著下降，HMW/總

5、脂聯素的比值也顯著下降。
　　2.TNF-α處理分化的3T3-L1脂肪細胞發(fā)現，脂聯素分泌顯著下降，HMW/總脂聯素的比值也顯著下降;Real-time和Western blot分析表明，TNF-α處理顯著的抑制內質網分子伴侶ERO1-Lα和DsbA-L的表達。
　　3.PPARγ激動劑、抑制劑處理及PPARγ敲減實驗證實，PPARγ可促進ERO1-Lα和DsbA-L的轉錄。在克隆ERO1-Lα和DsbA-L的啟動子序列的基

6、礎上，生物信息預測及雙熒光素酶報告基因實驗結果表明，PPARγ可增強ERO1-Lα和DsbA-L的啟動子活性;染色質免疫共沉淀實驗證實，PPARγ可特異地與ERO1-Lα和DsbA-L啟動子區(qū)-1685/-1533bp和-939/-815bp處的PPRE元件結合，調控ERO1-Lα和DsbA-L基因的表達，TNF-α處理顯著抑制PPARγ與相應PPRE元件結合。
　　4.TNF-α可抑制ERp44的轉錄，超表達PPARγ不能挽救這