小檗堿對(duì)人脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素、瘦素分泌的影響.pdf

1、目的： 1、原代培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞，并誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞。 2、研究小檗堿對(duì)人脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素、瘦素分泌的影響。 方法： 1、原代分離培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞： 選擇擇期開(kāi)腹手術(shù)病人，無(wú)全身代謝及內(nèi)分泌疾病，無(wú)服用干預(yù)糖及脂肪代謝的藥物史。取無(wú)菌條件下新鮮切除的人大網(wǎng)膜脂肪組織，剔除肉眼可見(jiàn)的結(jié)締組織與血管，充分剪碎的脂肪組織用Ⅰ型膠原酶消化，消化液通過(guò)尼龍膜過(guò)濾，濾液以600×g離心10分鐘后，加入D

2、MEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)后接種。 2、前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞： 37℃、5％CO<,2>孵育12小時(shí)細(xì)胞基本貼壁后，換分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化。前3天用含IBMX的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)，第3天至第8天改不含IBMX的分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)。從第9天分對(duì)照組和小檗堿組，孵育細(xì)胞24小時(shí)。分別于干預(yù)藥物前后收集細(xì)胞上清，凍存于-80℃，備同期同批ELISA測(cè)定APN和Lp． 3、測(cè)定培養(yǎng)液中APN和Lp蛋白含

3、量： 運(yùn)用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA)測(cè)定測(cè)定培養(yǎng)液中APN、Lp蛋白含量。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 采用SPSS13.0軟件處理相關(guān)數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)用x±s表示，組問(wèn)比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、成功培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞。利用膠原酶消化法可培養(yǎng)出成分均一的前脂肪細(xì)胞。 2、成功誘導(dǎo)人前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞。在活體外，人前脂肪細(xì)胞在誘導(dǎo)分化因子作用下可被誘導(dǎo)分

4、化為脂肪細(xì)胞。 3、經(jīng)10μmol/L小檗堿干預(yù)脂肪細(xì)胞24小時(shí)后，脂聯(lián)素蛋白分泌量降低為：0.99±0.06VS0.62±0.03、瘦素的蛋白分泌量降低為：187.13±5.56VS137.62±4.31。 結(jié)論： 1、成功培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞為研究脂肪組織內(nèi)分泌功能提供實(shí)驗(yàn)細(xì)胞模型。 2、在離體實(shí)驗(yàn)中，研究小檗堿對(duì)人脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素、瘦素的分泌的直接作用為進(jìn)一步探討其改善胰島素抵抗機(jī)制奠