小檗堿對人脂肪細胞脂聯(lián)素、瘦素分泌的影響.pdf

1、目的： 1、原代培養(yǎng)人前脂肪細胞，并誘導分化為脂肪細胞。 2、研究小檗堿對人脂肪細胞脂聯(lián)素、瘦素分泌的影響。 方法： 1、原代分離培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細胞： 選擇擇期開腹手術病人，無全身代謝及內(nèi)分泌疾病，無服用干預糖及脂肪代謝的藥物史。取無菌條件下新鮮切除的人大網(wǎng)膜脂肪組織，剔除肉眼可見的結締組織與血管，充分剪碎的脂肪組織用Ⅰ型膠原酶消化，消化液通過尼龍膜過濾，濾液以600×g離心10分鐘后，加入D

2、MEM/F12基礎培養(yǎng)基制成細胞懸液，細胞計數(shù)后接種。 2、前脂肪細胞誘導分化為脂肪細胞： 37℃、5％CO<,2>孵育12小時細胞基本貼壁后，換分化培養(yǎng)液誘導分化。前3天用含IBMX的分化培養(yǎng)基誘導，第3天至第8天改不含IBMX的分化培養(yǎng)基誘導。從第9天分對照組和小檗堿組，孵育細胞24小時。分別于干預藥物前后收集細胞上清，凍存于-80℃，備同期同批ELISA測定APN和Lp． 3、測定培養(yǎng)液中APN和Lp蛋白含

3、量： 運用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA)測定測定培養(yǎng)液中APN、Lp蛋白含量。 4、統(tǒng)計學處理： 采用SPSS13.0軟件處理相關數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)用x±s表示，組問比較采用t檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結果： 1、成功培養(yǎng)人前脂肪細胞。利用膠原酶消化法可培養(yǎng)出成分均一的前脂肪細胞。 2、成功誘導人前脂肪細胞分化為脂肪細胞。在活體外，人前脂肪細胞在誘導分化因子作用下可被誘導分

4、化為脂肪細胞。 3、經(jīng)10μmol/L小檗堿干預脂肪細胞24小時后，脂聯(lián)素蛋白分泌量降低為：0.99±0.06VS0.62±0.03、瘦素的蛋白分泌量降低為：187.13±5.56VS137.62±4.31。 結論： 1、成功培養(yǎng)人前脂肪細胞并誘導分化為脂肪細胞為研究脂肪組織內(nèi)分泌功能提供實驗細胞模型。 2、在離體實驗中，研究小檗堿對人脂肪細胞脂聯(lián)素、瘦素的分泌的直接作用為進一步探討其改善胰島素抵抗機制奠