性激素對人網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞分泌瘦素和脂聯(lián)素的影響.pdf

1、目的：通過體外原代培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞，并誘導(dǎo)其分化為成熟脂肪細(xì)胞，研究這一過程中性激素對其分泌瘦素和脂聯(lián)素的影響。 方法： 1、選擇擇期開腹手術(shù)病人的新鮮脂肪組織，要求無全身代謝及內(nèi)分泌疾病，無服用干預(yù)糖及脂肪代謝的藥物史。年齡范圍(40±8)歲，體重指數(shù)(BMI)＜25kg/m2。 2、采用膠原酶消化的方法分離培養(yǎng)人大網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)其分化，通過對細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察及油紅O脂肪染色抽提法對細(xì)胞進(jìn)行鑒定，觀

2、察原代培養(yǎng)人前脂肪細(xì)胞增殖和分化的過程。 3、分別在前脂肪細(xì)胞增殖和分化過程中隔日收集基礎(chǔ)組、分化組及性激素干預(yù)組的細(xì)胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附法同批檢測所收集細(xì)胞上清液中瘦素和脂聯(lián)素蛋白含量。 4、待前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞后分別用不同濃度的雌二醇和睪酮干預(yù)24h同時收集細(xì)胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附法同批檢測所收集細(xì)胞上清液中瘦素和脂聯(lián)素蛋白含量。 5、統(tǒng)計學(xué)處理：分析結(jié)果用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.0

3、5有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、成功培養(yǎng)了原代人網(wǎng)膜前脂肪細(xì)胞。前脂肪細(xì)胞形態(tài)與成纖維細(xì)胞相似，人工誘導(dǎo)分化后，第4天左右可見胞漿內(nèi)出現(xiàn)反光的脂質(zhì)小滴，隨分化進(jìn)程脂滴逐漸增多，16天左右大部分分化為成熟脂肪細(xì)胞。 2、前脂肪細(xì)胞增殖期可檢測到低水平的瘦素分泌。在分化期，瘦素分泌量隨誘導(dǎo)分化進(jìn)程而持續(xù)增多，于第16天達(dá)高峰，之后保持高水平分泌狀態(tài)至誘導(dǎo)分化完成。雌二醇干預(yù)組各時間段的瘦素分泌水平較分化組有明顯的升高，

4、而睪酮干預(yù)組則明顯降低。前脂肪細(xì)胞增殖期始終未檢測到脂聯(lián)素的分泌，在分化誘導(dǎo)到第5天才檢測到低水平的分泌，此時倒置顯微鏡下已可觀察到有內(nèi)含脂滴的脂肪細(xì)胞出現(xiàn)，第11天分泌量達(dá)最高峰，第16天分泌量可見明顯下降。而雌二醇和睪酮干預(yù)組各時間段的脂聯(lián)素分泌水平較分化組均明顯降低。 3、雌二醇對脂肪細(xì)胞分泌的瘦素有促進(jìn)作用，而高濃度的睪酮對瘦素的分泌有抑制作用。 4、雌二醇和睪酮對脂肪細(xì)胞分泌的脂聯(lián)素均有抑制作用。 結(jié)論