葉酸介導(dǎo)EGCG-BSA納米制劑的制備及體外功能研究.pdf

1、表沒食子兒茶素沒食子酸(EGCG，epigallocatechin-3-gallate)是綠茶中提取分離出的茶多酚類的生物活性物質(zhì)，具有毒性低、來源廣、易溶于水等優(yōu)點。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多學(xué)者研究證明EGCG具有抗腫瘤、抗氧化、抗菌消炎等生物活性，是一類極具開發(fā)前景的天然產(chǎn)物。但是，EGCG在體內(nèi)對腫瘤組織的定向攻擊很弱，生物利用度非常差，目前使用高劑量的EGCG注射劑來高效控制或是抑止腫瘤細(xì)胞生長與轉(zhuǎn)移還非常的困難，這些都嚴(yán)重

2、影響臨床治療的效果。
　　前列腺癌被認(rèn)為是發(fā)病最廣的癌癥之一，在歐美前列腺癌導(dǎo)致的死亡率僅次于肺癌，列第二。我國前列腺癌發(fā)病率已由20世紀(jì)50年代的0.2/10萬人增至20世紀(jì)90年代的1.2～3.4/10萬人，70歲以上的男性，前列腺前期癌的發(fā)病率達(dá)25％。最近研究發(fā)現(xiàn)，常飲綠茶可以有效降低前列腺癌發(fā)病率，科學(xué)家研究表明，該有效作用成分即為綠茶中的EGCG。EGCG可以調(diào)節(jié)癌細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白，并且能控制腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期，使癌

3、細(xì)胞失去轉(zhuǎn)移和擴散的能力。靶肉給藥系統(tǒng)（TDDS）是一種新的制劑技術(shù)與工藝，他能將治療藥物最大限度得輸送到靶器官，而對非靶器官影響很小，從而達(dá)到高效低毒的治療效果，尤其適用于治療癌癥等疾病。
　　本課題主要是基于EGCG的優(yōu)點，結(jié)合納米技術(shù)和靶向工藝，通過去溶劑法納米制備技術(shù)，獲得EGCG的納米靶向制劑。同時結(jié)合微觀檢測技術(shù)及細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，研究該方法下制備EGCG納米靶向制劑的最優(yōu)化工藝;同時，將制備的EGCG納米制劑作用于前列腺

4、癌細(xì)胞PC-3，研究其對腫瘤細(xì)胞的靶向作用，以及對其進(jìn)行功能性和活性評價。以此獲得具有優(yōu)良穩(wěn)定性、高生物利用度、腫瘤靶向性的EGCG納米注射制劑及其相應(yīng)的制備工藝和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
　　本論文研究得出:
　　1、采用原子力顯微鏡(AFM)觀測納米粒形貌和粒徑，所得FA-EGCG-BSANP的平均粒徑為200 nm左右，且分布均勻;
　　2、高效液相法測定EGCG的載藥量和包封率，測得結(jié)果為:EGCG的包封率可達(dá)(81.5

5、±1.8)％，載藥量為(29.3±0.6)％;
　　3、紫外分光光度法進(jìn)行全波長掃描，測定葉酸和白蛋白的偶聯(lián)量，測定結(jié)果為，葉酸偶聯(lián)量為18.363μg· mg-1BSA;
　　4、以激光共聚焦和熒光分光光度計測定FA-EGCG-BSANP對PC-3細(xì)胞的靶向性，測定結(jié)果為，PC-3細(xì)胞對FA-EGCG-BSANP的攝取量為EGCG-BSANP的23.65倍，并且呈現(xiàn)較強的濃度依賴性。同等濃度下FA-EGCG-BSANP對P

6、C-3細(xì)胞的抑制率為82.8％，而純EGCG溶液和EGCG-BSANP分別為58.6％和55.1％，并且抑制率同PC-3細(xì)胞對這些粒子的攝取能力正相關(guān);
　　5、MTT法測定其體外活性，結(jié)果表明，F(xiàn)A-EGCG-BSANP能明顯提高EGCG對PC-3細(xì)胞的靶向效果，并提高了對細(xì)胞的致死作用，從而提高了EGCG作為一種潛在抗癌藥物的治療效果，為進(jìn)一步探索該納米粒在體內(nèi)的靶向性、活性和代謝規(guī)律提供了前期實驗基礎(chǔ)。
　　通過以上實