畢赤酵母表達(dá)硒代重組人血清白蛋白和幾種豆科植物有機(jī)硒含量的比較.pdf

1、硒(Selenium)是生物體必需的微量元素，具有抑制癌癥、延緩衰老等作用，含硒藥物的開發(fā)己成為一個研究熱點。人血清白蛋白(HSA)也具有很高的藥用價值，但是安全性限制了血源HSA的廣泛應(yīng)用。本文根據(jù)加入亞硒酸鈉后酵母便可以產(chǎn)生硒代氨基酸的思路，把轉(zhuǎn)基因畢赤酵母在含硒基質(zhì)中培養(yǎng)，以期得到營養(yǎng)價值高、毒性小、利于吸收利用的硒代重組蛋白質(zhì)。
　　 將能夠成功表達(dá)重組人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德畢赤酵母培養(yǎng)至誘導(dǎo)期后，流加亞硒酸鈉

2、，對照發(fā)酵液不加入亞硒酸鈉，通過對比相同菌株在兩組培養(yǎng)基中表達(dá)的rHSA的含硒量，判斷硒能否以硒代氨基酸(SeMet.SeCys)的形式存在于重組蛋白質(zhì)中。發(fā)酵液經(jīng)熱處理、超濾、離子交換和丙酮沉淀等步驟后，進(jìn)行Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳、X射線能量色散譜(EDX)和原子吸收分析。結(jié)果表明，加硒發(fā)酵液樣品中硒元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比對照多23.2％，硒與蛋白質(zhì)的質(zhì)量比為0.0069,高于對照發(fā)酵液近35倍，初步證明無機(jī)硒可以被畢赤酵

3、母同化，轉(zhuǎn)化為硒代氨基酸，并形成硒代重組蛋白質(zhì)。
　　 豆科植物的蛋白質(zhì)含量高，營養(yǎng)豐富，有很好的保健功效，是對無機(jī)硒進(jìn)行生物有機(jī)化的理想載體，具有較強(qiáng)的生物富集能力。本文通過對不同品種豆科植物的硒含量進(jìn)行了比較發(fā)現(xiàn)，米自低硒地區(qū)的9號蕓豆、10號奶花豆的蛋白富硒能力比較好，10號尤其明顯；來自高硒地區(qū)的1號大豆中硒含量也較高，而且大豆蛋白的營養(yǎng)價值高于其它豆科植物蛋白；最終確定豆科植物蛋白的提取方法為：浸泡、研磨、過濾制漿、離