熱休克蛋白增加細(xì)菌抗逆性和乙醇產(chǎn)量的研究.pdf

1、大腸桿菌能夠利用戊糖和己糖，產(chǎn)生酸性和中性物質(zhì)，不能大量生成乙醇。枯草芽孢桿菌能夠利用各種碳水化合物，產(chǎn)生乙酸、乳酸和丙酸等混合酸，不能大量生成乙醇。運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌具有高活性丙酮酸脫羧酶(PDC)和乙醇脫氫酶(ADHB)，能很好地發(fā)酵己糖生成乙醇。因此將三者發(fā)酵生成乙醇的特征基因改造、重組，是目前研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)，并且具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)潛力。 本研究運(yùn)用基因工程重組技術(shù)，用Lac啟動(dòng)子調(diào)控運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單胞菌礎(chǔ)基因和adhb基因

2、，構(gòu)建能在大腸桿菌中表達(dá)的LAP操縱子，可使大腸桿菌發(fā)酵糖生產(chǎn)乙醇；然后導(dǎo)入來(lái)自超嗜熱菌強(qiáng)烈火球菌(pvrococcusfvriosus)的小分子熱休克蛋基因(hsp)，構(gòu)建能在大腸桿菌中表達(dá)的LAPH操縱子。同時(shí)，構(gòu)建在枯草芽孢桿菌中表達(dá)的BLAP操縱子，使枯草芽孢桿菌發(fā)酵糖生產(chǎn)乙醇；然后導(dǎo)入hsp基因，構(gòu)建在枯草芽孢桿菌中表達(dá)的BLAPH操縱子；用Luxs啟動(dòng)子替代Lac啟動(dòng)子，構(gòu)建能在枯草芽孢桿菌中表達(dá)的BSAP操縱子和BSAPH

3、操縱子。并進(jìn)行了基因工程菌的發(fā)酵耐受性實(shí)驗(yàn)和產(chǎn)乙醇實(shí)驗(yàn)。結(jié)果如下： (1)以菌種LAP為對(duì)照，熱休克蛋白使菌種LAPH 50oC溫度耐受性提高40.7倍，乙醇的產(chǎn)量增高高達(dá)4.74倍： (2)以菌種BSAP為對(duì)照，熱休克蛋白使菌種BSAPH的50oC的溫度耐受性增加1倍，5％乙醇耐受性增加0.37倍、10％乙醇耐受性增加4.85倍，乙醇產(chǎn)量增加0.67倍： (3)以菌種BIAP為對(duì)照，熱休克蛋白使菌種BIAPH的