血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學發(fā)光試劑盒的研制.pdf

1、分類號：17331密級：學位類別：科學學位口專業(yè)學位口冒學校代碼：10062學號：M20093003學科門類：醫(yī)學又肄眚科鼻號碩士學位論文Ⅳ【ASTER’SDISSERTATIoN論文題目：血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學發(fā)光試劑盒的研制TITLEThedevelopmentofthekitoftheenzymeChemiluminescencedetectionforserumthymidinekinasewithmonoclonala

2、ntibody一級學科：基礎醫(yī)學二級學科：免疫學論文作者：趙群莉指導教師：鄧為民導師組成員：李宏釗天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要目的研制特異性強、靈敏度高的檢測STKl(血清胸苷激酶)的單克隆抗體酶促化學發(fā)光試劑盒，以用于腫瘤早期檢測、預后和術后觀察及臨床療效監(jiān)控。方法一制各一對抗STKl單克隆抗體。l抗體制備A設計并合成長度為15個氨基酸的STKl多肽，并與載體蛋白KLH耦聯制備多肽抗原；B從Raf

3、t細胞提取物中純化獲得TKl抗原蛋白；c抗STKl多肽抗原單克隆抗體的制備：常規(guī)免疫Balb／c小鼠，選擇血清抗體滴度較高的小鼠，取脾細胞與SP2／0小鼠骨髓瘤細胞進行細胞融合，用間接ELISA篩選獲得7株高親和力的抗STKl多肽的單克隆抗體，用于制備包被抗體：D抗Raft細胞TKl抗原蛋白單克隆抗體的制備：方法如C，獲得3株高親和力的Raji細胞TKl抗原蛋白單克隆抗體，用于制備檢測抗體：2抗體鑒定通過對小鼠進行小規(guī)模的腹水生產，用蛋

4、白質A親合柱從每個腹水樣本中分離純化單克隆抗體，經ELISA、免疫印跡法鑒定單克隆抗體效價、特異性、親和力以及種屬交叉反應，最后用旋轉瓶培養(yǎng)技術進行抗體生產。二制作STKl酶促化學發(fā)光試劑盒1抗體配對將7株高親和力的抗STKl多肽的單克隆抗體和3株高親和力的Raft細胞TKl抗原蛋白單克隆抗體配對，用ELISA進行測試。2標記抗體使用辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)標記檢測抗體。3化學發(fā)光法試劑盒工作

5、參數的確定以魯米諾、對一2甲苯酚、吐溫20為化學發(fā)光底物；經比較確定包被抗體和檢測抗體的稀釋度；包被抗體即用稀釋的抗體加在酶標板上40C溫育過夜，之后洗滌，干燥過夜，用透明膠帶封存。4試劑盒技術參數的測定即靈敏度、準確度、精密度、穩(wěn)定性、特異性、相關性測定。結果通過實驗得到靈敏度高的10株抗體，它們是Antip一1—1A9；Anfip一1—3D3；Antip1485；Antip1—4D3；Antip一1—4F7；Antip一2—287；