FMDV非結構蛋白抗體化學發(fā)光快速檢測試劑盒的研發(fā).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩56頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、口蹄疫(foot-and-mouth diseases,F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth diseases virus,F(xiàn)MDV)引起的危害豬、牛、羊等偶蹄動物的重大動物傳染病。在臨床診斷中,早期、快速、準確地檢測FMDV感染對于防控FMD的大流行來說是至關重要的。化學發(fā)光免疫分析(chemiluminiscence immunoassay, CLIA)作為最新的標記檢測技術,由于其具有極高的敏感性、信噪比以及寬的線

2、性范圍而在診斷艾滋病、肝炎、腫瘤等領域廣泛應用。目前關于診斷FMD的CLIA方法還未見報道。
  本研究利用原核表達系統(tǒng)成功表達了FMDV的非結構全長蛋白3ABC、2C和五株位于3A、3B上的單表位蛋白分別命名為3Aepi1、3Aepi2、3Bepi1、3Bepi2、3Bepi3。其中,3ABC和2C蛋白以包涵體的形式表達,五株單表位蛋白以可溶性的形式表達。利用親和層析等層析技術實現(xiàn)了對上述蛋白的高通量純化。Western blo

3、t結果顯示,純化后的所有蛋白都能和FMDV感染陽性血清反應。間接ELISA結果表明3ABC、2C、3Bepi1、3Bepi2蛋白具有良好地區(qū)分FMDV感染陽性血清和陰性血清的能力。
  分別將單獨的3ABC蛋白和混合的3ABC和2C蛋白作為包被抗原成功建立了兩種檢測豬FMDV感染的CLIA方法,即豬-3ABC-CLIA和豬-3ABC-2C-CLIA。通過檢測712份已知FMD背景的豬血清表明豬-3ABC-2C-CLIA(診斷敏感性

4、為100%,診斷特異性為96.47%)的準確性要明顯高于豬-3ABC-CLIA(診斷敏感性為95.73%,診斷特異性為95.87%)。通過對田間962份樣品的檢測表明豬-3ABC-2C-CLIA與國產(chǎn)商品化ELISA試劑盒的符合率為96.15%,與進口商品化試劑盒的符合率為97.81%。通過對感染FMDV的豬進行血清學監(jiān)測表明,在通常情況下,各商品化ELISA試劑盒最早可以在感染后的6d-9d判定豬感染了FMDV,相比之下,豬-3ABC

5、-2C-CLIA在感染后的1 d-4d即可判定豬感染FMDV。此外,該CLIA方法具有檢測快速的優(yōu)點,可在15min內完成檢測,并具有良好的重復性與穩(wěn)定性。
  在此基礎上,成功建立了檢測??谔阋叻墙Y構蛋白抗體的CLIA方法即牛-3ABC-2C-CLIA。通過檢測460份已知FMD背景的牛血清表明該方法診斷敏感性為96.86%、診斷特異性為93.38%。通過對田間810份隨機樣品的檢測表明該CLIA方法與國產(chǎn)ELISA試劑盒的符合

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論