人博卡病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1u,非結(jié)構(gòu)蛋白ORFx和NP1的原核表達(dá)與抗體制備.pdf

1、瑞典科學(xué)家Tobias Allander等于2005年10月從下呼吸道感染嬰幼兒的分泌物中發(fā)現(xiàn)了一種新的細(xì)小病毒,即人博卡病毒(HumanBocavirus,HBoV),HBoV是一種DNA病毒,單鏈線狀,病毒粒子無囊膜,基因組全長5299 nucleotide(HBoVisolate st2)屬于細(xì)小病毒科中細(xì)小病毒亞科里面的博卡病毒屬。
　　 HBoV和所有的其他已知的細(xì)小病毒屬的病毒一樣,含有至少兩個衣殼蛋白(VP2和VP

2、1)和一個編碼非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)及中間開放讀碼框架,在病毒感染細(xì)胞時非結(jié)構(gòu)蛋白NS1最先被轉(zhuǎn)錄和翻譯,通過與病毒復(fù)制原點結(jié)合起來從而啟動病毒DNA的復(fù)制。對病毒的序列分析發(fā)現(xiàn)一個未知蛋白ORFx,它在細(xì)小病毒科中并無同源基因。到目前為止NP1蛋白功并不清楚,采用Cratch Protein Predictor預(yù)測的NP1蛋白并用ProtFun分析后的結(jié)果顯示NP1蛋白不是具有催化功能的酶蛋白,但可能與病毒基因的翻譯過程有關(guān)。為了對非結(jié)

3、構(gòu)蛋白基因ORFx,NP1和結(jié)構(gòu)蛋白基因VP1u的功能更好研究,本實驗分別對它們進(jìn)行克隆,原核表達(dá)及多克隆抗體的制備。
　　 本實驗根據(jù)我們實驗室克隆得到的中間大片段人博卡病毒序列(該序列已經(jīng)提交GeneBank,登錄號為:GU139423)設(shè)計ORFx,VP1u和NP1引物,通過PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。并將它們克隆到原核表達(dá)載體pMAL-c2X中,利用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白的產(chǎn)生,并用Amylose親和層析柱純化含目的蛋白的融合