A型流感病毒NP蛋白的原核表達(dá)及初步應(yīng)用.pdf

1、流感病毒是流行性感冒的病原體,根據(jù)其核蛋白與基質(zhì)蛋白抗原性的不同分為甲,乙,丙三型。A型流感病毒(Influenza A virus)屬正粘病毒科,由8個節(jié)段組成的單股負(fù)義RNA鏈,共編碼10種多肽,其中由第5節(jié)段的RNA編碼的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有種群和型的特異性,是流感病毒分型和診斷的基礎(chǔ)。因此,在原核或真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)NP蛋白,可用于A型流感酶免檢測方法的探索,為A型流感病毒的臨床診斷提供及時準(zhǔn)

2、確的參考信息。
　　 本研究采用合成的A型流感病毒(A/duck/Zhejiang/11/2000(H5N1))NP DNA基因作為模板,PCR法擴(kuò)增得NP基因全長為1498bp,編碼498個氨基酸,構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化表達(dá)載體,所表達(dá)的A型流感NP蛋白相對分子質(zhì)量為57 KD左右；將流感NP蛋白免疫動物制備兩種抗血清,純化抗血清中的抗體用作A型流感酶免檢測中的包被和標(biāo)記抗體,最終用于A型流感雙抗體夾心檢測方法初步探索。
　

3、　 本文研究的主要內(nèi)容:
　　 (1)本研究利用人工合成A型流感病毒株H5N1 NP DNA基因序列作為模板,構(gòu)建原核重組質(zhì)粒pET-30 Xa/LIC-NP,并誘導(dǎo)該原核重組質(zhì)粒在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)、純化A型流感NP蛋白；
　　 (2)用純化后的NP蛋白免疫羊、兔,收取羊抗NP血清、兔抗NP血清,純化并用HRP標(biāo)記羊抗NP多抗和兔抗NP多抗；
　　 (3)A型流感雙抗體夾心檢測方法(酶聯(lián)免疫法)初步探索,