肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白（LCMR1）的原核表達(dá)、多克隆抗體制備及其應(yīng)用的初步研究.pdf

1、目的：肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白LCMR1是我們實(shí)驗(yàn)室采用mRNA差異顯示技術(shù)克隆到的新基因(GenBankID：AY148462)，本課題擬通過(guò)原核表達(dá)獲取LCMR1純化融合蛋白質(zhì)，并制備LCMR1抗體，然后在蛋白質(zhì)水平研究LCMR1在多種組織和細(xì)胞中的表達(dá)，進(jìn)一步研究該基因的功能。 方法：(1)優(yōu)化pGEX-5T/LCMR1原核質(zhì)粒的表達(dá)條件，使之在大腸桿菌系統(tǒng)穩(wěn)定地表達(dá)融合蛋白GST-LCMR1，然后應(yīng)用親和層析技術(shù)純化融合蛋白并通

2、過(guò)WesternBlot免疫印跡和MALDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)純化的蛋白進(jìn)行鑒定；(2)通過(guò)應(yīng)用GST-LCMR1蛋白免疫新西蘭兔和免疫原性肽抗體技術(shù)兩種不同策略制備LCMR1抗體；(3)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和組織芯片技術(shù)對(duì)LCMR1在多種細(xì)胞和組織中的表達(dá)進(jìn)行研究。 結(jié)果：(1)確定了LCMR1原核表達(dá)的關(guān)鍵表達(dá)參數(shù)：誘導(dǎo)溫度為20℃、誘導(dǎo)時(shí)間為4h及誘導(dǎo)劑IPTG終濃度為0.6mmol/L，使之可以在大腸桿菌中穩(wěn)定表達(dá)，并

3、應(yīng)用谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析樹(shù)脂成功純化GST-LCMR1蛋白，其純度可達(dá)到85％以上；(2)通過(guò)將純化的GST-LCMR1融合蛋白免疫新西蘭兔和免疫原性肽抗體技術(shù)兩種不同策略成功制備了LCMR1抗體，并證實(shí)兩種抗體均有較好的免疫活性和特異性；(3)LCMR1在人正常甲狀腺組織和橫紋肌組織以及卵巢癌組織中低表達(dá)，在95C和95D細(xì)胞以及在肺、胃、肝臟、心臟、結(jié)腸、食道和前列腺等多種正常和相應(yīng)腫瘤組織中高表達(dá)，而且在95C和95D細(xì)胞以及