人胰島素固相酶促半合成及其工藝的研究.pdf

1、糖尿病(DiabetesMellitus，DM)是僅次于心腦血管疾病和癌癥的威脅人類生命的第三殺手，糖尿病作為一種嚴(yán)重的非傳染性慢性疾病，已成為世界各國關(guān)注的重大公共衛(wèi)生問題。胰島素是最有效的抗糖尿病藥物之一。與基因工程生產(chǎn)人胰島素(HI)相比，豬胰島素(PI)酶促半合成人胰島素的方法研制生產(chǎn)所需的投資少，周期短，符合我國現(xiàn)階段國情。柱上轉(zhuǎn)肽由于工藝簡化，反應(yīng)時間縮短，是一個值得探討的重要課題。 本文在本教研室前期工作的基礎(chǔ)上進

2、一步優(yōu)化和改進了固定化胰蛋白酶(ITP)催化豬胰島素一步法合成人胰島素的工藝，并嘗試將每一步進行放大，為工業(yè)化生產(chǎn)作準(zhǔn)備。利用新工藝，即直接通異丁烯氣體的方法合成了符合轉(zhuǎn)肽要求的蘇氨酸叔丁醚叔丁酯，純度可達97.7％，收率穩(wěn)定，將反應(yīng)放5倍，能達到同樣的純度和收率?？焖僦苽涓呋盍Φ墓潭ɑ鹊鞍酌福盍挝粸?762.6U/g，縮短了時間，簡化了工藝，實驗放大10倍以上，適于工業(yè)化生產(chǎn)。重新篩選出一較好的轉(zhuǎn)肽系統(tǒng)BD(1,4丁二醇)/DM

3、SO(二甲亞砜)/Tris-HCl，轉(zhuǎn)肽率達73.4％，此系統(tǒng)用于柱上一步轉(zhuǎn)肽法半合成人胰島素，經(jīng)HPLC檢測，轉(zhuǎn)肽率可達58.6％。運用國產(chǎn)陰離子交換樹脂DEAE-SepharoseFF分離純化轉(zhuǎn)肽產(chǎn)物，純化效果較理想，與進口介質(zhì)Q-SepharoseFF相比降低了成本。制得的人胰島素經(jīng)鑒定和純度檢測，結(jié)果為：聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)為單一蛋白帶，遷移率與人胰島素標(biāo)準(zhǔn)品一致；HPLC為單一蛋白峰，保留時間與人胰島素標(biāo)準(zhǔn)品相同。