磁敏性羥基微球的構建及在固定青霉素酰化酶中的應用.pdf

1、　　固定化酶可以提高酶的穩(wěn)定性并增加酶的使用次數，以及易與產物和底物分離等優(yōu)點而被廣泛深入的研究。但目前常用的固定化方法在制備固定化酶時酶活損失較大，限制了固定化酶的產業(yè)化應用。本文針對目前固定化酶方法的不足之處提出了相應解決方法，并通過對用于固定酶的磁敏性載體及固定化過程進行了深入細致研究，取得有益的成果?！　”疚牟捎脩腋【酆戏ê铣闪艘幌盗幸源判訤e3O4為核心的甲基丙烯酸羥乙酯-苯乙烯共聚球狀磁性微球，經環(huán)氧氯丙烷活化，制備活化度

2、達到1600μmol/g，粒徑為120～200μm的微球。通過對不同交聯度的活化微球進行固定化青霉素?；笇嶒?，發(fā)現交聯度30﹪的微球固定化酶效果最優(yōu)，并進一步對固定化青霉素酰化酶的條件進行了研究，得到了較好的固定化參數：給酶量為2000U/g(干載體)，反應時間為24h，反應溫度35℃，pH為8.0。在此條件下進行酶固定化，固定化酶活性為782.2U/g(干載體)，固定化效率88.72﹪，活性回收率為33.63﹪；水解青霉素G鉀鹽的最

3、適溫度為45℃，最適PH為8.5；固定化酶的儲存和操作穩(wěn)定性良好。除此之外，測定了酶促反應的動力學常數：溶液酶和固定化酶的米氏常數，分別為1.188×10-5mol/L和5.879×i0-4mol/L，苯乙酸的競爭性抑制常數為2.685×10-4mol/L。應用苯乙酸作為酶定向化固定試劑，使酶固定化過程中活性回收比同等條件下不加苯乙酸的提高8.35﹪?！　⊥ㄟ^研究，最終獲得了一種磁敏性、高性能的青霉素?；篙d體和應用酶競爭性抑制劑作為