TNF-α增強(qiáng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫抑制作用的探討.pdf

1、目的:探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromalcells，BMSCs)免疫抑制作用的影響。
　　方法:采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)小鼠BMSCs，觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)鑒定小鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD29、CD34和CD44的表達(dá);應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)小鼠BMSCs的CXCR4的表達(dá);通過(guò)油紅O和阿爾新蘭染色分別來(lái)鑒定BMSCs成脂和成軟骨誘導(dǎo); Elisa試劑盒

2、檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白介素-10(IL-10)和前列腺素2(PGE2)的表達(dá);通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞的環(huán)氧化物水解酶2(COX-2)和NF-κB蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果:體外培養(yǎng)的小鼠BMSCs快速貼壁并呈現(xiàn)克隆性生長(zhǎng)，集落中心增殖的細(xì)胞大多為圓形，邊緣細(xì)胞呈梭形;流式細(xì)胞術(shù)鑒定觀察到小鼠BMSCs表面標(biāo)志物CD29陽(yáng)性表達(dá)率為84.89％，CD44陽(yáng)性表達(dá)率為95.77％，而CD34呈陰性表達(dá)

3、;免疫熒光檢測(cè)到CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到100％;油紅O和阿爾新蘭染色后明顯看到BMSCs分化為脂肪細(xì)胞及軟骨細(xì)胞; Elisa試劑盒檢測(cè)25ng/ml和50ng/mlTNF-α處理組上清液中IL-10的表達(dá)水平和對(duì)照組相比沒(méi)有明顯的增加，而在100ng/mlTNF-α刺激時(shí)，細(xì)胞上清液中IL-10的表達(dá)水平較對(duì)照組明顯增加(p=0.002＜0.05)，而細(xì)胞上清液中PGE2的表達(dá)也有相似的結(jié)果，在100ng/mlTNF-α刺激時(shí)，P