骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療小鼠自身免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis,AIH)的發(fā)病與誘發(fā)因素、自身抗原應(yīng)答、遺傳易感性和免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)等相關(guān)。單用糖皮質(zhì)激素或聯(lián)合免疫抑制劑存在疾病完全緩解率低,需要長(zhǎng)期服藥和類(lèi)腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)綜合癥等多種副作用。AIH最終可進(jìn)展為肝硬化并需要肝移植,尋找更安全、有效和經(jīng)濟(jì)的治療方法將有深遠(yuǎn)的意義。對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells,MSCs)的理化特性和實(shí)際應(yīng)用的研究為AIH

2、的治療提供了新的方向。MSCs具有免疫抑制、多向分化和抗纖維化等多方面的作用。本研究探討MSCs對(duì)AIH小鼠模型的治療作用及其可能的機(jī)制,并觀察MSCs預(yù)移植對(duì)AIH小鼠成模的影響。
  材料和方法:
  1.AIH小鼠動(dòng)物模型的建立。分次腹腔注射同種異體小鼠肝s-100抗原與弗氏完全佐劑乳化液,首次注射后第4周予以鑒定模型是否建立。
  2.MSCs移植對(duì)AIH小鼠模型療效觀察。AIH小鼠隨機(jī)分為三組:MSCs移植治

3、療組(組1),給予1×106/只MSCs單次尾靜脈注射;地塞米松治療組(組2),給予0.25mg/g·周DXM分次腹腔注射;空白對(duì)照組(組3),給予0.05ml/只·周PBS腹腔注射;實(shí)驗(yàn)第5周和第9周取肝臟制作病理切片,取血清測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(glutamic-pyruvictransaminase,ALT)水平。
  3.觀察MSCs對(duì)AIH成模的影響。分為兩組:首日MSCs移植,隔日給予造模處理(組Ⅰ);首日給予磷酸鹽緩沖液(p

4、hosphatebufferedsolution,PBS)注射,隔日造模處理(組Ⅱ)。首次注射后4周取肝臟做病理檢查,取血清標(biāo)本測(cè)ALT。
  4.體外MSCs上清液對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響:凝膠層析技術(shù)分離小鼠肝s-100抗原第1峰(s-100-1),用小鼠淋巴細(xì)胞分離液分離出正常小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞,進(jìn)行分組:刀豆蛋白A培養(yǎng)組(組A);刀豆蛋白A聯(lián)合MSCs上清液培養(yǎng)組(組B);s-100-1培養(yǎng)組(組C);s-100-1聯(lián)合MS

5、Cs上清液培養(yǎng)組(組D)。對(duì)各組進(jìn)行淋巴細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn),后測(cè)各組吸光度(opticaldensity,OD)值。
  結(jié)果:
  1.AIH小鼠模型的建立:AIH小鼠肝臟平均炎癥評(píng)分為2.67±0.516,Knodell評(píng)分5.50±1.975,血清學(xué)AIL水平為122.00±15.476。
  2.MSCs移植于AIH小鼠的療效觀察:
  2.1造模后(第4周)小鼠血清ALT為122.00±15.476U/L

6、。第5周,組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為:101.43±9.144U/L、115.00±10.315U/L和118.33±15.161U/L。三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05),組1和組2兩組間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第9周,組1、組2和組3小鼠血清ALT分別為:84.00±6.557U/L、98.83±15.767U/L和107.50±11.777U/L,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組1和組2兩組間比

7、較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  2.2造模后(第4周)小鼠肝臟Knodell評(píng)分為5.50±1.975。第5周,組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評(píng)分分別為:3.00±1.528、3.33±1.366和4.67±1.862,三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),組1和組2差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。第9周,組1、組2和組3小鼠肝臟Knodell評(píng)分分別為:2.00±1.291、2.67±0.516和4.33

8、±2.066,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組1和組2差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  3.MSCs預(yù)移植對(duì)小鼠AIH模型成模的研究:
  3.1組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的ALT水平分別為:52.17±15.741U/L和122.±15.476U/L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  3.2組Ⅰ和組Ⅱ小鼠的肝臟Knodell評(píng)分分別為:3.33±0.816和5.50±1.975,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

9、5)。
  4.體外MSCs上清液對(duì)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響:
  組A的OD值為0.267±0.167,組B的OD值為0.217±0.128,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。組C的OD值為0.165±0.187,組D的OD值為0.082±0.051,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.同種異體肝抗原與弗氏完全佐劑乳化液注射方法可以復(fù)制出AIH小鼠模型。
  2.MSCs移植可以減低

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