芒果苷抑制脂多糖誘導慢性炎癥的分子機制研究.pdf

1、炎癥是最重要的基本病理過程之一，各種炎癥性疾病在人類疾病譜中占據(jù)極為重要的地位。典型的慢性炎癥性疾病，如慢性支氣管炎等，時至今日依然是嚴重困擾極大數(shù)量人群的常見疾病。不僅如此，近年來的研究表明，許多原本認為與炎癥無關或關系不大的疾病事實上也與炎癥密切相關。已有大量的研究證據(jù)表明，原發(fā)性高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、代謝綜合征、2型糖尿病也是一種慢性炎癥過程，并且炎癥機制在其眾多并發(fā)癥中持續(xù)發(fā)揮重要的促進作用。在與心血管疾病、糖尿病一

2、樣對預期壽命構(gòu)成嚴重威脅的惡性腫瘤的發(fā)病機制中，慢性炎癥也是一個普遍而重要的因素。革蘭陰性菌外膜的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是誘發(fā)慢性炎癥損傷的最主要的病原分子之一，許多疾病與LPS誘導的持續(xù)亞臨床炎癥密切相關。基于與上述研究發(fā)現(xiàn)相似的、仍在不斷增加的證據(jù)，抑制LPS相關慢性炎癥可能是阻止許多疾病發(fā)生以及治療眾多炎癥性疾病的關鍵，然而現(xiàn)有的藥物并不能滿足在此領域?qū)嵤┯行幬锔深A的需求。
　　基于對慢性炎

3、癥復雜多樣的病理生理機制的理解，從作用溫和但藥理效應廣泛的天然藥物中尋找抗炎藥物可能是一個合理的選擇。芒果葉為漆樹科植物芒果Mangifera indica L.的葉，芒果苷(mangiferin)是芒果葉中的主要活性成分，是一種天然多酚類化合物。既往進行的研究表明，芒果苷對實驗性急性炎癥、實驗性慢性增生性炎癥、實驗性免疫性炎癥均具有顯著抑制作用，臨床用于治療呼吸道感染性炎癥的咳嗽、咳痰、喘息、發(fā)熱等癥狀具有顯著療效，并且安全記錄良好。

4、雖然芒果苷的具體作用機制目前尚未完全明確，但這些研究證據(jù)已經(jīng)提示芒果苷具備成為有效抑制慢性炎癥的藥物的潛質(zhì)。
　　為闡明芒果苷抑制LPS相關慢性炎癥的作用機制，本研究采用LPS誘導的慢性炎癥大鼠為研究對象，探討芒果苷對LPS誘導的慢性炎癥的抗炎效應及其分子機制。
　　第一部分脂多糖誘導慢性炎癥大鼠模型的建立
　　目的:探討小劑量LPS間斷注射建立大鼠慢性炎癥模型的可行性。
　　方法:48只SD大鼠隨機分為6組，每

5、組8只，分別接受生理鹽水與40μg/kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg、200μg/kg體重劑量LPS尾靜脈注射，每周1次，共4周，第4周末評估各組大鼠慢性炎癥反應，確定合適的建模LPS劑量。隨后以40只SD大鼠隨機分為5組，每組8只，按照確定的LPS劑量尾靜脈注射LPS，每周1次，共4周，分別于第1、2、3、4周末評估LPS所致慢性炎癥反應。
　　結(jié)果:未觀察到實驗動物死亡。SD大鼠間斷尾靜脈注射40μg/

6、kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg劑量的LPS共4周未能誘導經(jīng)典的慢性系統(tǒng)性炎癥。200μg/kg劑量的LPS間斷尾靜脈注射4周，可引起外周血白細胞總數(shù)與中性粒細胞比例的穩(wěn)定增加，血清hs-CRP、IL-6、TNF-α持續(xù)于較高水平，并導致以炎性細胞浸潤、組織瘀血水腫為主要病理表現(xiàn)的組織病理變化。
　　結(jié)論:小劑量間斷尾靜脈注射LPS建立SD大鼠慢性系統(tǒng)性炎癥模型是可行的，可供研究LPS相關慢性炎癥長期研究觀

7、察之用。
　　第二部分芒果苷對脂多糖誘導慢性炎癥的抗炎效應
　　目的:探討芒果苷對LPS誘導慢性炎癥的抗炎效應。
　　方法:90只健康雄性SD大鼠隨機分為對照(Control)組、模型(Model)組、潑尼松(PNS)5mg.kg-1.d-1組與芒果苷高劑量(MGFH，200mg.kg-1.d-1)、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量（MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組15只，均為灌胃

8、給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預4周后，取血進行大鼠全血白細胞計數(shù)與分類;取血分離血清，ELISA測定hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1:HE染色觀察心臟、肝臟、肺臟、腎臟病理形態(tài)變化。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH組全血白細胞計數(shù)、中性粒細胞比例與血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平均明顯降低(P＜0.01)，心臟、肝臟、肺臟、腎臟的慢性炎癥性損傷較輕。MGF

9、M組、MGFL組全血白細胞計數(shù)、中性粒細胞比例與血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平與Model組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，心臟、肝臟、肺臟、腎臟的慢性炎癥性損傷仍較明顯。
　　結(jié)論:芒果苷可有效抑制LPS誘導的慢性系統(tǒng)性炎癥，其作用機制可能與其抑制白細胞動員活化、降低炎性細胞因子水平、減輕炎癥性組織損傷有關。
　　第三部分芒果苷對脂多糖誘導慢性炎癥中環(huán)氧合酶/脂氧合酶的雙重抑制作用

10、　　目的:探討芒果苷對LPS誘導慢性炎癥中COX-1、COX-2、5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物的抑制作用。
　　方法:50只SD大鼠隨機分為對照(Control)組、模型(Model)組與芒果苷高劑量（MGFH，200mg.kg-1.d-1）、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量(MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組10只，均為灌胃給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預4周后，

11、取血分離白細胞與血清，ELISA測定白細胞COX-1、COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物LT-B4、LT-C4、LT-D4、LT-E4; RT-PCR測定COX-1、COX-2、5-LOX、12-LOX的mRNA表達。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH與MGFM組的白細胞COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α，以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物LT-B4、LT

12、-C4、LT-D4、LT-E4，均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05），MGFH組并可見白細胞COX-1水平明顯降低(P＜0.01)。除LT-D4水平低于Model組外(P＜0.05)，MGFL組的白細胞COX-1、COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α，以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物LT-B4、LT-C4、LT-E4與Model組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:芒果苷對LPS誘導慢性炎癥中的CO

13、X-1、COX-2與5-LOX、12-LOX存在雙重抑制作用，可能是芒果苷抑制LPS相關慢性炎癥的作用機制之一。
　　第四部分芒果苷對脂多糖誘導慢性炎癥中CD14-TLR4-MAPK細胞信號轉(zhuǎn)導通路基因表達的影響
　　目的:探討芒果苷對LPS誘導慢性炎癥中CD14-TLR4-MAPK細胞信號轉(zhuǎn)導通路主要信號分子基因表達的影響。
　　方法:90只SD大鼠隨機分為對照(Control)組、模型(Model)組、潑尼松(PN

14、S)5mg.kg-1.d-1組與芒果苷高劑量(MGFH，200mg.kg-1.d-1)、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量（MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組15只，均為灌胃給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預4周后，取血分離白細胞，RT-PCR測定CD14、TLR4、MyD88、P38、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH組白細胞C

15、D14、TLR4、MyD88、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達明顯較低(P＜0.01)，但P38的mRNA表達無明顯下調(diào)(P＞0.05)。MGFM、 MGFL組CD14、TLR4、MyD88、P38、ERK、JNK、NF-KB基因的mRNA表達與Model組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:芒果苷可有效地下調(diào)白細胞CD14、TLR4、MyD88、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達，可能是芒果苷抑制LPS誘