芒果苷抑制脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥的分子機(jī)制研究.pdf

1、炎癥是最重要的基本病理過程之一，各種炎癥性疾病在人類疾病譜中占據(jù)極為重要的地位。典型的慢性炎癥性疾病，如慢性支氣管炎等，時至今日依然是嚴(yán)重困擾極大數(shù)量人群的常見疾病。不僅如此，近年來的研究表明，許多原本認(rèn)為與炎癥無關(guān)或關(guān)系不大的疾病事實(shí)上也與炎癥密切相關(guān)。已有大量的研究證據(jù)表明，原發(fā)性高血壓、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、代謝綜合征、2型糖尿病也是一種慢性炎癥過程，并且炎癥機(jī)制在其眾多并發(fā)癥中持續(xù)發(fā)揮重要的促進(jìn)作用。在與心血管疾病、糖尿病一

2、樣對預(yù)期壽命構(gòu)成嚴(yán)重威脅的惡性腫瘤的發(fā)病機(jī)制中，慢性炎癥也是一個普遍而重要的因素。革蘭陰性菌外膜的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是誘發(fā)慢性炎癥損傷的最主要的病原分子之一，許多疾病與LPS誘導(dǎo)的持續(xù)亞臨床炎癥密切相關(guān)。基于與上述研究發(fā)現(xiàn)相似的、仍在不斷增加的證據(jù)，抑制LPS相關(guān)慢性炎癥可能是阻止許多疾病發(fā)生以及治療眾多炎癥性疾病的關(guān)鍵，然而現(xiàn)有的藥物并不能滿足在此領(lǐng)域?qū)嵤┯行幬锔深A(yù)的需求。
　　基于對慢性炎

3、癥復(fù)雜多樣的病理生理機(jī)制的理解，從作用溫和但藥理效應(yīng)廣泛的天然藥物中尋找抗炎藥物可能是一個合理的選擇。芒果葉為漆樹科植物芒果Mangifera indica L.的葉，芒果苷(mangiferin)是芒果葉中的主要活性成分，是一種天然多酚類化合物。既往進(jìn)行的研究表明，芒果苷對實(shí)驗(yàn)性急性炎癥、實(shí)驗(yàn)性慢性增生性炎癥、實(shí)驗(yàn)性免疫性炎癥均具有顯著抑制作用，臨床用于治療呼吸道感染性炎癥的咳嗽、咳痰、喘息、發(fā)熱等癥狀具有顯著療效，并且安全記錄良好。

4、雖然芒果苷的具體作用機(jī)制目前尚未完全明確，但這些研究證據(jù)已經(jīng)提示芒果苷具備成為有效抑制慢性炎癥的藥物的潛質(zhì)。
　　為闡明芒果苷抑制LPS相關(guān)慢性炎癥的作用機(jī)制，本研究采用LPS誘導(dǎo)的慢性炎癥大鼠為研究對象，探討芒果苷對LPS誘導(dǎo)的慢性炎癥的抗炎效應(yīng)及其分子機(jī)制。
　　第一部分脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥大鼠模型的建立
　　目的:探討小劑量LPS間斷注射建立大鼠慢性炎癥模型的可行性。
　　方法:48只SD大鼠隨機(jī)分為6組，每

5、組8只，分別接受生理鹽水與40μg/kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg、200μg/kg體重劑量LPS尾靜脈注射，每周1次，共4周，第4周末評估各組大鼠慢性炎癥反應(yīng)，確定合適的建模LPS劑量。隨后以40只SD大鼠隨機(jī)分為5組，每組8只，按照確定的LPS劑量尾靜脈注射LPS，每周1次，共4周，分別于第1、2、3、4周末評估LPS所致慢性炎癥反應(yīng)。
　　結(jié)果:未觀察到實(shí)驗(yàn)動物死亡。SD大鼠間斷尾靜脈注射40μg/

6、kg、80μg/kg、120μg/kg、160μg/kg劑量的LPS共4周未能誘導(dǎo)經(jīng)典的慢性系統(tǒng)性炎癥。200μg/kg劑量的LPS間斷尾靜脈注射4周，可引起外周血白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞比例的穩(wěn)定增加，血清hs-CRP、IL-6、TNF-α持續(xù)于較高水平，并導(dǎo)致以炎性細(xì)胞浸潤、組織瘀血水腫為主要病理表現(xiàn)的組織病理變化。
　　結(jié)論:小劑量間斷尾靜脈注射LPS建立SD大鼠慢性系統(tǒng)性炎癥模型是可行的，可供研究LPS相關(guān)慢性炎癥長期研究觀

7、察之用。
　　第二部分芒果苷對脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥的抗炎效應(yīng)
　　目的:探討芒果苷對LPS誘導(dǎo)慢性炎癥的抗炎效應(yīng)。
　　方法:90只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對照(Control)組、模型(Model)組、潑尼松(PNS)5mg.kg-1.d-1組與芒果苷高劑量(MGFH，200mg.kg-1.d-1)、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量（MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組15只，均為灌胃

8、給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預(yù)4周后，取血進(jìn)行大鼠全血白細(xì)胞計數(shù)與分類;取血分離血清，ELISA測定hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1:HE染色觀察心臟、肝臟、肺臟、腎臟病理形態(tài)變化。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH組全血白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞比例與血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平均明顯降低(P＜0.01)，心臟、肝臟、肺臟、腎臟的慢性炎癥性損傷較輕。MGF

9、M組、MGFL組全血白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞比例與血清hs-CRP、IL-6、TNF-α、sICAM-1水平與Model組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，心臟、肝臟、肺臟、腎臟的慢性炎癥性損傷仍較明顯。
　　結(jié)論:芒果苷可有效抑制LPS誘導(dǎo)的慢性系統(tǒng)性炎癥，其作用機(jī)制可能與其抑制白細(xì)胞動員活化、降低炎性細(xì)胞因子水平、減輕炎癥性組織損傷有關(guān)。
　　第三部分芒果苷對脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥中環(huán)氧合酶/脂氧合酶的雙重抑制作用

10、　　目的:探討芒果苷對LPS誘導(dǎo)慢性炎癥中COX-1、COX-2、5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物的抑制作用。
　　方法:50只SD大鼠隨機(jī)分為對照(Control)組、模型(Model)組與芒果苷高劑量（MGFH，200mg.kg-1.d-1）、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量(MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組10只，均為灌胃給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預(yù)4周后，

11、取血分離白細(xì)胞與血清，ELISA測定白細(xì)胞COX-1、COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物L(fēng)T-B4、LT-C4、LT-D4、LT-E4; RT-PCR測定COX-1、COX-2、5-LOX、12-LOX的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH與MGFM組的白細(xì)胞COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α，以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物L(fēng)T-B4、LT

12、-C4、LT-D4、LT-E4，均明顯降低（P＜0.01或P＜0.05），MGFH組并可見白細(xì)胞COX-1水平明顯降低(P＜0.01)。除LT-D4水平低于Model組外(P＜0.05)，MGFL組的白細(xì)胞COX-1、COX-2及其代謝產(chǎn)物PG E2、PG F2α，以及5-LOX、12-LOX及其代謝產(chǎn)物L(fēng)T-B4、LT-C4、LT-E4與Model組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:芒果苷對LPS誘導(dǎo)慢性炎癥中的CO

13、X-1、COX-2與5-LOX、12-LOX存在雙重抑制作用，可能是芒果苷抑制LPS相關(guān)慢性炎癥的作用機(jī)制之一。
　　第四部分芒果苷對脂多糖誘導(dǎo)慢性炎癥中CD14-TLR4-MAPK細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路基因表達(dá)的影響
　　目的:探討芒果苷對LPS誘導(dǎo)慢性炎癥中CD14-TLR4-MAPK細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要信號分子基因表達(dá)的影響。
　　方法:90只SD大鼠隨機(jī)分為對照(Control)組、模型(Model)組、潑尼松(PN

14、S)5mg.kg-1.d-1組與芒果苷高劑量(MGFH，200mg.kg-1.d-1)、中劑量(MGFM，100mg.kg-1.d-1)、低劑量（MGFL，50mg.kg-1.d-1）組，每組15只，均為灌胃給藥。以LPS間斷尾靜脈注射建立慢性炎癥模型。藥物干預(yù)4周后，取血分離白細(xì)胞，RT-PCR測定CD14、TLR4、MyD88、P38、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:與Model組比較，MGFH組白細(xì)胞C

15、D14、TLR4、MyD88、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達(dá)明顯較低(P＜0.01)，但P38的mRNA表達(dá)無明顯下調(diào)(P＞0.05)。MGFM、 MGFL組CD14、TLR4、MyD88、P38、ERK、JNK、NF-KB基因的mRNA表達(dá)與Model組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:芒果苷可有效地下調(diào)白細(xì)胞CD14、TLR4、MyD88、ERK、JNK、NF-κB的mRNA表達(dá)，可能是芒果苷抑制LPS誘