牙齦卟啉單胞菌脂多糖誘導細胞炎癥反應的信號通路研究及其蛋白酶的構(gòu)建和對炎癥慢性化的研究.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文牙齦卟啉單胞菌脂多糖誘導細胞炎癥反應的信號通路研究及其蛋白酶的構(gòu)建和對炎癥慢性化的研究姓名：張迪亞申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：谷志遠;陳莉麗20090401浙江大學博士學位論文 中文摘要初步探索g i n g i p a i n s 水解C D l 4 的活性及與慢性牙周炎的關系。上述問題的闡明有助于進一步了解P g 在慢性牙周炎中的發(fā)病機制．主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：第一部分牙齦卟啉單胞菌脂多

2、糖誘導細胞分泌炎癥因子的能力及相關的t o i l 樣受體和胞內(nèi)信號通路的研究實驗一、采用改良的熱酚．水法從P gA T C C 3 3 2 7 7 株中提取P g - L P S ，并獲得純化后的精制品。采用紅外光譜分析P g ．L P S 結(jié)構(gòu)、氣液色譜法分析P g ．L P S 單糖和脂肪酸種類和含量。采用鱟試驗檢測P g - L P S 的生物活性．結(jié)果顯示：紅外光譜分析顯示P g ．L P S 與E ．L P S 基本結(jié)構(gòu)相似

3、，但兩者的脂肪酸組成有所差異，所提取的P g - L P S 具有較高的生物活性( 耋1 5 ．0 n g ／m 1 ) ，可用于后續(xù)試驗。實驗二、以人單核細胞T H P ．1 株和人中性粒細胞H L ．6 0 株為效應細胞，分別用P g ．L P S 和商品化大腸桿菌0 1 l l ：B 4 株的脂多糖( E - L P S ) 刺激后，酶聯(lián)免疫試劑盒檢測I L 一6 、I L —l J 3 和T N F —Q 水平。結(jié)果顯示：( D

4、 1 g g ／m lP g - L P S 分別作用0 ．5 、6 和6h 或1I _ l g ／m lE ．L P S 分別作用6 、2 4 和2 4 h ，T H P ．1 細胞分泌的T N F ．0 t 、I L —l p 和I L ．6 水平明顯升高( P0 ．0 5 ) ，但誘生的I L ．1 D 和I L ．6 最高濃度明顯低于P g ．L P S ( P < 0 ．0 5 ) ．實驗三、采用T L R 2 或T L

5、 R 4 抗體阻斷試驗聯(lián)合E L I S A 檢測，了解L P S 結(jié)合靶細胞上T o l l 樣受體的類型。在P g ．L P S 或E ．L P S 作用前先分別加入終濃度為2p g ／m l 的兔抗人T L P , 2 或T L R 4 抗體；酶聯(lián)免疫試劑盒檢測I L ．6 、I L ．1 p 和T N F ．a(chǎn)水平的變化，從而確定L P S 的主要信號通路受體。廚時采用R T - P C R 方法檢測了L P S 處理和非處理的