扛板歸對(duì)大鼠肝纖維化的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:肝纖維化是慢性肝病的共同病理改變,它不僅是慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必由之路,而且貫穿于肝硬化的始末,甚至發(fā)展到肝癌。因此,對(duì)肝纖維化的研究己經(jīng)成為全世界研究的熱門課題,以期阻斷肝硬化和肝癌的發(fā)生,延緩疾病進(jìn)程。
　　肝纖維化的治療目前尚無特效藥,近年的一些研究顯示中醫(yī)藥在肝纖維化的治療方面具有很大優(yōu)勢,中藥扛板歸(拉丁名: Polygonum perfoliatum L,別名:貫葉蓼、河白草、蛇見退等)中的槲皮素、金絲桃苷等具

2、有能清除自由基、抗氧化、抗乙肝病毒、抑制肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSC)的增殖與活化、抑制膠原合成、保肝等作用。關(guān)于扛板歸對(duì)大鼠肝纖維化的作用及機(jī)制研究,國內(nèi)外還未見報(bào)道。本課題通過二甲基亞硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型,不同濃度扛板歸干預(yù)后,分別觀察各組大鼠一般情況、體重變化、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,

3、 AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase, ALT)含量,放免法檢測血清透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)、層粘蛋白(laminin, LN)含量,肝臟常規(guī)制片并HE染色觀察組織病理學(xué)改變,免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠肝組織中轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)因子β1(Transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrix metalloprotei

4、nase-1, MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1( tissueinhibitor of matrix metalloproteinase-1, TIMP-1)表達(dá)情況,以探討扛板歸的抗炎,抗纖維化的作用及機(jī)制,為該中藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法: SPF級(jí)SD大鼠72只,體重180~220g,雄性,適應(yīng)性喂養(yǎng)2d,每組12

5、只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、秋水仙堿組、扛板歸高劑量組、扛板歸中劑量組、扛板歸低劑量組。除正常對(duì)照組外,余60只造模。模型復(fù)制:每只動(dòng)物按2ml.kg-1劑量,腹腔注射0.5％DMN,連續(xù)注射三天,停藥四天,造模時(shí)間為四周,共注射12次。第一周用2/3劑量,以后用全量。藥物處理:秋水仙堿組劑量為0.1mg.kg-1,扛板歸高、中、低劑量組分別為7.5g.kg-1、5g.kg-1、2.5g.kg-1,除正常對(duì)照組和模型組給予等體積生理

6、鹽水灌胃外,各組均灌胃給藥,1次/d,連續(xù)4周。4周末,實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),全部大鼠禁食、禁水12小時(shí)后,先稱體重,然后摘眼球取血4~5毫升,日本OLYMPUS-AU2700全自動(dòng)生化分析儀檢測各組大鼠血清AST、ALT含量,放免法檢測各組大鼠血清 HA、LN含量;蘇木素-伊紅染色(HE)染色,觀察各組大鼠肝組織形態(tài)改變;免疫組織化學(xué)方法檢測各組大鼠肝臟TGF-β1, MMP-1,MMP-2, TIMP-1表達(dá)情況。
　　結(jié)果:扛板歸高劑

7、量組、扛板歸中劑量組中大鼠毛色、食量等一般情況及體重指標(biāo)明顯好于模型組(均 p<0.05);血清中 AST、ALT、HA、LN含量較模型組明顯降低(均p<0.05);病理形態(tài)學(xué)觀察,扛板歸高劑量組、扛板歸中劑量組中大鼠肝臟炎癥壞死程度和纖維化程度明顯低于模型組(均p<0.05);免疫組化結(jié)果顯示,扛板歸高劑量組、扛板歸中劑量組中大鼠肝組織MMP-1表達(dá)高于模型組,有顯著性差異(均p<0.05);扛板歸高劑量組、扛板歸中劑量組中大鼠肝組織

8、MMP-2、TIMP-1、TGF-β1表達(dá)較模型組明顯降低,有顯著性差異(均p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、扛板歸能夠改善DMN誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠一般形態(tài)及體重,降低血清中 AST、ALT、HA、LN水平,說明扛板歸能夠較好的降酶,保肝,降低肝纖維化指標(biāo),對(duì)肝纖維化具有較好的抑制作用,且與應(yīng)用劑量有關(guān)。
　　2、扛板歸能夠明顯減輕DMN誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝細(xì)胞的變性和壞死,降低肝臟炎癥活動(dòng)度和抑制膠原纖維的合成,

9、減少肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)異常增生,從而起到抗肝纖維化作用。
　　3、扛板歸抗肝纖維化作用可能通過降低DMN誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝組織TGF-β1、TIMP-1、MMP-2蛋白表達(dá),增加MMP-1蛋白表達(dá),使HSC的增殖活化受到抑制,減少膠原合成,增加Ⅰ、Ⅲ型膠原的降解,使細(xì)胞外基質(zhì)的減少有關(guān)。
　　綜上所述,扛板歸具有綜合的抗肝纖維化的作用,抑制 TGF-β1的表達(dá)可能是其抗肝纖