PKC-ERK信號通路在丙泊酚調控新生大鼠海馬神經干細胞增殖中的作用研究.pdf

1、目的:研究丙泊酚對新生SD大鼠海馬神經干細胞增殖的影響及相關機制。
　　方法:體外分離培養(yǎng)新生SD大鼠海馬神經干細胞(NSCs)，免疫熒光法鑒定神經干細胞。
　　不同濃度的丙泊酚(0，5，10，20，40，80μM)分別處理神經干細胞，WST-1法檢測NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測NSCs增殖率，流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度，免疫印跡法檢測細胞膜PKCα和細胞pERK1/2蛋白的表達。
　　神經干細胞分為5組給

2、藥:空白對照組、脂肪乳對照組、20μM丙泊酚組、20μM維拉帕米組、20μM丙泊酚+20μM維拉帕米組，WST-1法檢測NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測NSCs增殖率，免疫印跡法檢測細胞膜PKCα和細胞pERK1/2蛋白的表達。
　　神經干細胞分為6組給藥:空白對照組、DMSO對照組、脂肪乳對照組、20μM丙泊酚組、10μM Chelerythrine組、20μM丙泊酚+10μM Chelerythrine組，WST-1法檢測

3、NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測NSCs增殖率，免疫印跡法檢測細胞pERK1/2蛋白的表達。
　　神經干細胞分為6組給藥:空白對照組、DMSO對照組、脂肪乳對照組、20μM丙泊酚組、20μM PD98059組、20μM丙泊酚+20μM PD98059組，采用WST-1法檢測NSCs增殖活性，BrdU摻入法檢測NSCs增殖率。
　　結果:分離培養(yǎng)的新生SD大鼠海馬神經干細胞生長狀況良好，懸浮生長，細胞聚集成團，形成圓形的神

4、經球。傳代之后繼續(xù)培養(yǎng)6天的神經球呈巢蛋白(Nestin)免疫反應陽性，采用10％胎牛血清誘導分化，多分化為呈神經元核蛋白(neuronal nuclei，NeuN)免疫反應陽性的神經元和膠質纖維酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein，GFAP）免疫反應陽性的星型膠質細胞。
　　與0μM組相比，丙泊酚（5，10，20，40，80μM）顯著抑制了神經干細胞的增殖，降低了細胞內鈣離子濃度，抑制鈣離子依賴

5、的PKCα活化，降低神經干細胞pERK1/2的表達，且濃度增大，抑制作用增強。
　　丙泊酚和維拉帕米處理細胞之后，與空白對照相比，脂肪乳對神經干細胞的增殖、PKCα活化、pERK1/2的表達均無顯著影響;丙泊酚或維拉帕米單獨使用均能顯著抑制神經干細胞的增殖，抑制鈣離子依賴的PKCα活化，減少神經干細胞pERK1/2的表達，并且維拉帕米比丙泊酚的抑制作用更強;而二者聯合應用處理神經干細胞后，與丙泊酚組相比，維拉帕米顯著增強了丙泊酚的

6、抑制效應;而與維拉帕米組相比，丙泊酚并未顯著增強維拉帕米的抑制效應。
　　丙泊酚和Chelerythrine處理細胞之后，與空白對照相比，無論DMSO或者脂肪乳對神經干細胞的增殖、pERK1/2的表達均未有顯著影響;丙泊酚或Chelerythrine單獨使用均能顯著抑制神經干細胞的增殖，下調神經干細胞pERK1/2的表達，且Chelerythrine比丙泊酚的抑制作用更強;而二者聯合應用處理神經干細胞后，與丙泊酚組相比，Chele

7、rythrine顯著增強了丙泊酚的抑制效應;而與Chelerythrine組相比，丙泊酚并未顯著增強Chelerythrine的抑制效應。
　　丙泊酚和PD98059處理細胞之后，與空白對照組相比，無論DMSO或者脂肪乳對神經干細胞的增殖均無顯著影響，丙泊酚或PD98059單獨使用均能顯著抑制神經干細胞的增殖，并且PD98059比丙泊酚的抑制作用更強;而二者聯合應用處理神經干細胞后，與丙泊酚組相比，PD98059顯著增強了丙泊酚的