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
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文檔簡介
1、目的:研究TrkB受體通過CaMKIV/CREB通路對體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)增殖的促進(jìn)作用。方法在體外分離培養(yǎng)并鑒定的新生大鼠海馬NSCs中,分別用40ng/mlBDNF、用TrkB shRNA慢病毒激動或者抑制TrkB受體,用50μMW-7抑制CaM,采用CCK-8法檢測NSCs增殖情況。在此分組基礎(chǔ)上,用CaMKIVsiRNA抑制CaMKIV,再用免疫共沉淀檢測CaMKK的絲氨酸
2、/蘇氨酸磷酸化水平,免疫印跡檢測CaMKIV和CREB磷酸化水平。數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)誤(means±SE)表示,統(tǒng)計分析采用單因素方差分析(ANOVA),或多因素方差分析,多個實驗組與一個對照組比較用最小顯著差法(LSD),p<0.05為統(tǒng)計學(xué)有差異。
結(jié)果:①BDNF組NSCs增殖率明顯高于對照組(p<0.05),且72小時達(dá)到高峰,而TrkBshRNA慢病毒組NSCs增殖低于對照組(p<0.05):同時抑制TrkB受體和
3、CaM后,NSCs的增殖進(jìn)一步受到抑制,其細(xì)胞增殖低于慢病毒干擾組(p<0.05);②BDNF作用組,CaMKK的絲氨酸/蘇氨酸磷酸化水平、CaMKIV及CREB磷酸化水平均高于TrkBshRNA慢病毒組、W-7組和CaMKIVsiRNA組(p<0.05);③W-7組和CaMKIV siRNA組,pCREB和pCaMKIV的表達(dá)低于BDNF組(p<0.05)。
結(jié)論:①TrkB受體可調(diào)節(jié)NSCs的增殖。②TrkB受體可經(jīng)過
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